水貂绿脓杆菌蜂胶佐剂二价灭活苗的研制

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1、TheR&DofpropolisadjuvantofMinkP．aerugmosa●VaCClneThe："submittedt01heslssubmlQ[ngdaoAgriculturalUniversityInFuWdlmentoftheRequirementfortheDegreeof—MasterofAgronomyAuthor：SunHaifang(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：Prof．ShanHuQingdao．ChinaJune,2012独创性声明本人声明所呈交

2、的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。珊懿磊丑、溉帅：乃l硅乞妨日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发

3、表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名．鞠＼李芳导师签名：时圊：乃)}年乞日2姆时间：如p年己月砑日水貂绿脓杆菌蜂胶佐剂二价灭活苗的研制摘要水貂绿脓杆茵(MinkP．aeruginosa)是水貂出血性肺炎、眼角膜炎的重要致病茵，每年可造成养殖场6％．54％的死亡率，严重危害水貂养殖业事业。疲劳运输、环境恶劣、营养不良等都会引发该病，由于其对抗生素不敏感且极易产生耐药性，造成病貂发病后根治困难。控制该病主要以预防为主，治疗为辅，但目前尚无可有效针对水貂绿脓杆茵的疫苗问世。本课题以山东各地貂场流行的致病绿脓茵株中筛选

4、出两株优势菌株G型水貂绿脓杆菌诸城株(G．ZC株)与B型水貂绿脓杆茵荣成株03．RC株)为茵种，以具有多种生物学特性及免疫增强作用的蜂胶为佐剂，开展绿脓杆茵蜂胶佐剂二价灭活苗的研制及免疫效果评价研究。进行绿脓杆菌G．ZC株、B．RC株的生化特性、培养特性、免疫原性及毒力研究，开展疫苗研制前、后的一系列检验(包括纯粹检验、无菌检验、物理性状检验、安全浊检验等)及疫苗最佳保存条件及保质期研究，并用研制的绿脓杆菌蜂胶佐剂二价灭活苗免疫小鼠及水貂，通过测定免疫动物血清中的抗体水平高低进行免疫保护效果评价及免疫保护期研究。通过记录G．ZC株、B．RC株菌株在不同培养

5、条件下的OD值并分别绘制生长曲线，进行G-ZC株、B．RC株的培希r-4寺性研究，结果获得了可有效增茵的改良培养基，用改良后的培养基对G．ZC株、B．RC株进行增茵培养，到达平台期时的茵浓度分别为6．97x1011CFU／mL、2．43x1012CFU／mL。以腹部皮下注射方式对健康易感小鼠及水貂进行绿脓杆茵攻毒试验，并以半数致死浓度(LC50)表示毒力大小，LC50由改良寇氏法计算，最后得出G．ZC茵株对小鼠的LC50为4．49x109，对水貂的LC50为1．73x107；B-RC茵株对小鼠的LC50为1．73x109，对水貂的LC50为6．41x107

6、。用本试验研制的疫苗对水貂行一次单剂量接种、单剂量重复接种、一次超剂量接种，对疫苗的安全性进行检验，结果免疫部位均无炎症、无结节，免疫后水貂的精神状态、饮食、饮水、生长发育状况均正常，证实该疫苗安全性高、副作用小，吸收性好，不会引起动物免疫部位的炎症反应。免疫后30d对小鼠及水貂进行10LC50浓度的茵液攻毒，测得该疫苗对小鼠的免疫保护率为93．10％，对水貂达达5／5保护。对免疫后的水貂定期抽血，分离血清后以试管凝集法测定抗体效价，免疫后7d，即可在水貂体内普遍检出抗体，其平均抗体效价达1：5．2，21d水貂体内抗体水平普遍达到最高，平均抗体效价为1：2

7、4．8，免疫后60d水貂平均抗体效价仍可达到1：19．2，结果证实该绿脓杆茵蜂胶佐剂二价灭活苗免疫原，隆好且免疫持久．关键词：灭活苗；研制；检验；免疫保护力；抗体效价2TheR&DandofpropolisadjuvantvaccineofMinkP．aeruginosaAbstractMinkPseudomonasaeTugiIlosa(MinkP．aeruginosa)，isanimportantpathogenofhemorrhagicpneumoniaandceratitis,resultsin6％·54％mortalityofthefarmsea

8、chyear,andleadtOseriousdamagetOth