大鼠全脑照射后血清与脑组织内il-1β、tnf-α和il-6水平的变化

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1、▲查堕全堕墨堑亘垒堕墨堕塑堡塑!生!璺：!堕!：!塑!兰：鱼查垩盟奎些——————————————堕重前言目前，放射治疗仍然是占全身肿瘤1，3头颈部肿瘤的主要治疗手段，有时甚至是唯一的治疗手段。在治疗这些肿瘤时，不仅要使它们得到最大程度的控制甚至治愈，而且要使这些肿瘤患者有一个高质量的生存。由于放疗界的不懈努力及放射技术的进展，使得放疗疗效不断提高，患者生存期不断延长。但是，放射线是一把双刃剑，在杀灭肿瘤的同时，又使临近肿瘤区域的大脑不可避免地受到一定剂量的电离辐射。随着患者生存期的延长和影像诊断技术的更新

2、，被诊断为放射性脑损伤的患者也逐步增多，患者的生存质量受到影响IIdl。另外，自从立体定向放射外科、立体定向放射治疗及适形治疗应用于临床以来，放疗的工作范围得以不断扩大，而且将该技术应用于大脑良性疾病治疗的报道也越来越多。由于大脑是辐射剂量的限制性器官，为了制定出更为合理的放疗方案，必须对正常脑组织电离辐射后的反应和，或损伤的发生机制有更深入的了解。以往的研究主要集中在已发生脑损伤情况下的病理学、影像诊断学和剂量效应关系等方面。但是，至今仍没有较成熟的发病机制学说，临床上既无较早期的、客观的诊断指标，也无有

3、效的放射损伤治疗措施14-71。长期以来神经系统被认为是一块“免疫豁免区”，而近年来许多研究证实脑组织本身就是一个免疫器官。中枢神经系统(centralnervoussystemCNS)内也具有在免疫系统中起重要作用的细胞因子及其受体，并且发现它们对CNS神经元、胶质细胞的生长分化及生理功能具有调控作用

4、8‘9l。在脑缺血、脑出血、脑外伤、神经系统变性等常见的神经系统疾病中都发现有脑内细胞因子含量的变化，而这些因子的变化对神经系统的损伤及其损伤后的恢复均起着重要的调节作用博f。通过转基因和基因敲除动物实验，

5、迸一步揭示了细胞因子在人体生理和病理过程中所起的作用lloI。在有关放射性脑损伤的实验研究中，我们发现大鼠脑内局部血流大鼠全脑照射后血清及脑组织内ILlB、TNF．d和IL-6水平的变化前言量、组织病理以及兴奋性氨基酸神经递质的变化等方面与脑缺血、脑创伤等常见神经系统疾病的病理生理存在许多相似之处。由此我们推测放射性脑损伤与其它常见CNS疾病在发病机制上具有某些共同点。因此，在放射性脑损伤发病机制与防治的研究中可以利用其它类型脑损伤的研究方法与手段，对其中作用明确的几种细胞因子进行系统的研究，并比较它们在不

6、同性质脑损伤中的变化，以了解早期放射性脑损伤发生的分子机制。鉴于此，本课题拟通过建立大鼠全脑照射模型，对不同剂量照射后不同时间大鼠脑及血清中炎性细胞因子(IL．邛，TNF．n和IL．6)的含量进行测定，探讨它们在放射性脑损伤过程中的时相变化，以便为放射性脑损伤发病机制的研究提供新的理论依据。大鼠全脑照射后血清及脑组织内IL．1B、TNF．o和!!生查兰垫壅些盟垫塑查鳖材料和方法1．实验动物及分组：清洁级动物由苏州大学医学院提供。健康雌性Sprague—Dawley(sD)大鼠8．10周龄，体重180—220

7、9。随机分为对照组(未麻醉未照射)、麻醉未照射组、10Gy和30Gy组，每组8只，共80只。死亡大鼠共计9只，6只死于麻醉过量，2只死于照射过程中，1只30Gy照射后16天死亡，原因不明。均被排除在实验之外。2．照射方法及照射后观察：大鼠经体积分数为0．036的水合氯醛(1ml／1009体重)腹腔注射麻醉后，用PhilipsSL．18型加速器产生的4Mev电子束(剂量率为210．220cGy／min)，俯卧位全脑垂直照射，具体照射方法及剂量见文献iI¨。照射后观察期间，每周对大鼠头部照射区毛发与皮肤的情况、

8、肢体活动、提尾时身体旋转反射的有无以及体重的变化作1次检查并记录。3．取材：各照射组分别于照射后8小时、24小时、1周及1月时，用3．6％的水合氯醛(1mol／1009体重】腹腔注射麻醉后，经左心室抽取动脉血4-5ml，待1．2小时凝固后，4000转，分离心s分钟，取上清液，．70℃保存。抽血后用生理盐水经主动脉作全身灌注，完整取脑，取大脑皮层100rag左右，按20：l加入0．1mol／IPBS液后，充分研磨10分钟，取匀浆液于Eppendorf管内，Biofuge22HeraeusSepath离心机(德

9、国制造)4"C恒温15000转／分钟离心20分钟，取上清液，．70℃保存。对照组、麻醉未照射组与照射后8小时组同时采取标本。4．细胞因子的测定：用ELISA法测定，大鼠TNF-Q、IL．1B和IL．6试剂盒购买于美国Endogen公司。测定的步骤：①依据说明书配制不同浓度的标准品；②将标准品及待测标本加于已用特异性抗体包被的固相载体，大鼠全脑照射后血清及脑组织内IL．IB、TNF-n和IL-6查!塑銮些——塾整型