金银花多糖提取工艺和含量测定探究

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1、金银花多糖提取工艺和含量测定探究【摘要】目的：优化金银花多糖的提取工艺并对多糖的含量测定进行研究。方法：采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，水提醇沉法制备粗多糖，Sevag去蛋白法对多糖进行精制，以金银花总多糖提取率为指标，优选最佳提取工艺，并采用正交试验法对优选的最佳工艺参数进行优化。结果：影响金银花多糖提取率的各因素关系为：提取温度〉溶剂倍量〉提取时间〉提取次数；最佳提取工艺为：提取温度90°C,提取时间为1.5h,提取次数为2次，溶剂倍量为15倍量，多糖提取率为9.61%o结论：优选的工艺操作简便，多糖提取率高。【关键词】金

2、银花多糖；提取工艺；含量测定【中图分类号IR282.4【文献标识码】A【文章编号】1004-7484(2012)12-0011-02金银花为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花[1-2]o已有报道称多糖是金银花中有效成分之一，并有抗癌、抗肿瘤、提高人体免疫力等多种作用[3],目前国内对金银花多糖方面的研究仍较少。金银花的多糖提取工艺及含量测定研究有利于新的药效部位的开发，为金银花多糖的开发应用提供理论依据。1材料与仪器AB135-S型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；UV-110

3、0型双光束紫外-可见分光光度仪（上海天美科学仪器有限公司）；R1002型旋转蒸发仪（上海申顺生物科技有限公司）；TDL-5-A型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；金银花药材购自济南建联中药有限公司，经鉴定为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾；D-无水葡萄糖（中国药品生物制品检定所，批号110833-200503）；苯酚、硫酸等试剂均为分析纯，水为去离子水。2方法与结果2.1金银花多糖含量测定2.1.1含量测定方法D-无水葡糖糖作为标准品配制标准品溶液，采用苯酚-硫酸法［4］测定金银花提取物中

4、总多糖的含量。金银花总多糖提取率二提取物中总多糖含量/样品中总多糖含量X100%2.1.2标准曲线的绘制精密称定105£干燥至恒重的无水葡萄糖10.25mg置lOOmL容量瓶中，加纯净水稀释至刻度，备用。分别精密量取葡萄糖标准溶液0.0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.OmL置lOmL具塞试管中，加入1.6mL5%苯酚溶液，再加入7mL浓硫酸于溶液表面，摇匀，沸水浴加热15min,冷却20min后再加蒸憎水定容至相同体积，放置30min,于最大吸收波长下测定吸光度A,以吸光度A为纵坐标，葡萄糖标准液浓度C为横坐标

5、绘制标准曲线，得到回归方程A=48.1375C+0.1172,R=0.9995。2.1.3多糖的含量测定精密称取制得的多糖适量，置于lOOmL容量瓶中，精密量取5mL于50mL容量瓶中，加蒸馆水稀释至刻度，摇匀。精密量取供试液0.6mL于lOmL具塞试管中，按2.1.2方法测定吸光度，并计算多糖含量。2.2金银花多糖的制备采用本试验优选的最佳提取工艺提取金银花多糖。即向金银花药材中加入15倍量的水9（TC提取2次，每次1.5ho提取液过滤，滤液浓缩至体积适量后，加入95%乙醇使含醇量达75%,静置过夜，沉淀用无水乙醇冲洗、干

6、燥即得多糖粗品。对制得的粗多糖采用Sevag法去蛋白：将粗多糖溶于10倍量蒸馆水中，加入Sevag试剂（氯仿-正丁醇，25：5）萃取，重复操作至两相界面无变性蛋白产生为止。将萃取后的多糖溶液浓缩至适当体积，醇沉、洗涤、干燥得精制多糖。2.3金银花多糖提取工艺参数正交优选在单因素考察的基础上，以多糖提取率为指标，对提取温度（A）、提取次数（B）、溶剂倍量（C）及提取时间（D）4因素进行考察，选用L9（34）正交表进行试验，正交试验设计见表1,正交试验结果见表2,方差分析见表3。由上表可知各因素影响主次顺序为：A>C>D>B,即

7、提取温度〉溶剂倍量〉提取时间〉提取次数。方差分析结果表明，A即提取温度为主要影响因素（P