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1、降钙素基因相关肽在大鼠心脏的缺血后处理中的分泌表达及其作用费学涛1翟昌林2张松3（通讯作者）（1徐州医学院研究生部江苏徐州221002）（2浙江省桐乡市第一人民医院心内科浙江桐乡314500）（3上海新华医院200092）【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号］2095-1752（2012）01-0186-01降钙素基因相关肽在大鼠心脏的缺血后处理屮的分泌表达及作用，探讨如下：1材料和方法1.1模型建立雄性SD大鼠,麻醉前给予腹腔注射阿托品2mg/kg,2.5%戊巴比妥钠溶液（30mg/kg
2、）腹腔注射麻醉，麻醉满意后称重（310.8±8.84g）。接DHG-30小型动物呼吸机（浙江医科大学仪器厂）行机械通气，潮气量为3.5mL/kg体重，呼吸频率为80次/分，吸呼比为1：2,吸人氧浓度为50%。分离左侧第3、4肋骨暴露心脏。结扎左冠状动脉前降支。缺血30min后，松开结扎线再灌注2h,建立心肌缺血再灌注损伤模型。结扎后可见到下方大面积心肌表面发纽、室壁运动减弱，提示急性心肌梗死模型建模成功。发绡区充血发红为复灌成功标志。1.2实验分组40只雄性大鼠随机分为4组:假手术组（n
3、二10）、缺血再灌注组（n"0）、缺血后处理组（n=10）和缺血后处理+CGRP8-37组（n=10）o假手术对照组只穿线不结扎。后处理组结扎前降支30分钟，再灌注前给予10s的短暂复灌/停灌3个循环的后处理，再灌注2h。后处理+CGRP8-37组后处理前心腔注射CGRP&37（30nmol/kg上海默悉生物科技有限公司）。其余3组同等剂量的生理盐水。13标本收集1.3.1血浆标本的收集试验终点吋间，打开胸腔，心脏穿刺，取血5mI加入已预先冷冻的抗凝试管中(内含7.5mgEDTA和2500U抑肽酶)，
4、4000转/分钟，离心5分钟，取血清置于・70°C低温冰箱保存，供检测CGRP用。1.3.2心肌标本的收集试验终点时间，抽血后减下心脏，快速生理盐水清洗干净。・20度速冻5分钟，称重，分离左心室并称重，行TTC染色。置于体积分数10%的甲醛溶液中固定24h,将梗死区心肌剪下，仔细分离梗死区及非梗死区，进行称重。将左心室心肌加入冷磷酸盐缓冲液(4°C),匀浆器迅速制备心肌匀浆，3000r/min离心15min,取上清・70°C温箱保存,供TNF-α检测。1.4实验检测血清CGRP、心肌TNF
5、・α测定采用放射免疫法,操作步骤严格按说明书进行。1.5统计分析所有数据采用SPSS16.0进行统计分析，数值用均数&plusrrm;标准差(x・±s)表示，多组间比较方差齐用方差分析’方差不齐用秩和检验，P<0.05表示结果有统计学意义。2结果2.1血浆中CGRP含量变化再灌组低于其他3组(P&t;0.01),后处理组高于对照组和再灌组(P<0.01),后处理+CGRP8-37组高于其他3组(P<0.01),见表lo2.2心肌组织中TNF-α含
6、量变化再灌组高于其他3组(P<0.01),后处理组高于对照组低于再灌组(P<0.01),后处理+CGRP8-37组高于后处理组低于再灌组(P<0・05),见表1。2.3心肌梗死大小与再灌组比较，后处理组梗死区重量/左心室重量(％)、梗死区重量/全心重量(％)均减小(P<0.01)；后处理+CGRP8-37组与再灌组比较，梗死区重量/左心室重量(％)、梗死区垂量/全心重量(％)均减小，与后处理组比较增大(P<0.01)o见表2。3讨论缺血后处理概念1996年开始萌芽,200
7、3年Zhao等⑴在狗缺血再灌注研究中发现，在心肌缺血再灌注前对心脏进行短周期再灌、停灌处理，可以缩小梗死面积，减轻细胞水肿,改善心功能，因此正式提出了缺血后处理概念。CGRP是一种由降钙素基因表达的生物活性多肽，广泛分布于神经和心血管系统,具有强大的舒张周围血管的作用，对心脏有正性变力和变时效应。CGRP还具有强烈的扩张冠状动脉的作用[2]。CGRP对缺血和再灌注损伤的心肌细胞有保护作用。本实验研究结果显示再灌组CGRP表达减少，与之前报道相符，考虑CGRP参加缺血再灌注损伤的发生发展过程。缺血后处理
8、使CGRP表达增加，TNF浓度下降，心梗大小减小，证实其对心肌有保护作用。而加入CGRP受体拮抗剂后，与后处理组相比CGRP浓度升高,但TNF■α浓度升高,心梗大小增大，保护作用减弱，说明缺血后处理过程中有内源性CGRP释放，并对心肌起保护作用。与再灌组相比，加入CGRP受体拮抗剂后保护作用减小但是仍然存在并且有统计学差异，说明缺血后处理还通过其他作用机制发挥效应。CGRP的剂量及干预时间，CGRP对远期预后等的影响需进一步研究。参考文献[1
