孟鲁司特对大鼠神经病理性疼痛的拮抗作用及相关机理研究

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1、徐州医学院硕士学位论文孟鲁司特对大鼠神经病理性疼痛的拮抗作用及相关机理研究姓名：史晓甜申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：邢淑华；武玉清2012-05徐州医学院硕士学位论文孟鲁司特对大鼠神经病理性疼痛的拮抗作用及相关机理研究中文摘要目的观察白三烯受体拮抗剂孟鲁司特对CCI大鼠神经病理性疼痛的影响及相关机制。方法SD雄性大鼠(250士50曲36只，随机分为6组(n-6)：正常对照组(N)；假手术组(Sh锄)；CCI模型组(CCI)；孟鲁司特低剂量组(L)；孟鲁司特中剂量组(hD；孟鲁司特高剂量组(H)。通过ccI法制备神经病理性疼痛模型，孟鲁司特低、中、高剂量

2、组大鼠术后每天分别腹腔注射0．5、1、2mg／l(g的孟鲁司特溶液；其余各组分别腹腔注射等体积的溶媒；共给药14天。各组大鼠在CCI术前l天，术后1、3、5、7、14天，分别用Vonfhy法和Hargreaves法测量机械刺激缩足反射阈值(MWT)和和热缩足潜伏期(TWL)。采用ELISA法检测脊髓L4．6段匀浆液中IL．1D、IL．6以及TNF—a的表达水平，利用免疫荧光单标法检测Ibal的表达，通过免疫印迹方法检测脊髓L4-6匀浆液中磷酸化p38MAPK和NF．KBp65的表达，通过免疫组化技术检测脊髓L4．6段NF．心p65的表达，并且利用免疫荧光双标法检

3、测Ibal和磷酸化p38、Ibal和NF．1出的表达情况。结果1．孟鲁司特对CCI大鼠机械刺激缩足反射阈值(MwT)和和热缩足潜伏期(TwL)的影响各组大鼠在术前1天MWT和TWL均无显著性差异。术后1天、3天、5天、7天和14天，MWT和TWL值均显著降低俨<0．05)。而孟鲁司特低、中、高剂量均不同程度地抑制了CCI手术导致的MWT和TWL降低。2．孟鲁司特对CCI大鼠脊髓匀浆液中IL一1p，IL．6和TNF．仅水平的影响CCI组大鼠的IL．1B、lL．6以及TNF．0【分别为2880．39士1234．6l、6606．73土2421．42、2880．39士1

4、234．61(pg／mgtissue)，明显高于假手术组(P<0．05)；而孟鲁司特低、中、高剂量组的IL一1p，IL一6以及TNF一0【的含量均显著低于CCI组(尸<0．05)。徐州医学院硕士学位论文3．孟鲁司特对CCI大鼠脊髓背角小胶质细胞rbal表达的影响免疫荧光化学检测发现：与假手术组相比，CCI模型组大鼠脊髓背角Ibal的表达显著增强，小胶质细胞活化的数量显著增加，细胞体积明显增大；而低、中、高剂量的孟鲁司特均不同程度地抑制了脊髓背角小胶质细胞Ibal的表达和活化。4．免疫印迹检测孟鲁司特对CCI大鼠脊髓p38MAPK磷酸化和NF一1出p65活化的影响

5、免疫印迹结果显示：呻38MAPK在各组中都有表达，与假手术组相比较，CCI组哪38MAPK蛋白的表达明显增高p<0．01)：与CCI组比，孟鲁司特的低、中、高剂量组p-p38MAPK蛋白的表达均显著降低(P<0．05)，分别为CCI组的66．0％、70．3％、53．3％。另外，细胞核NF．1cBp65蛋白在各组中都有表达，与假手术组相比较，CcI组NF一心p65蛋白在细胞核中的表达明显增高妒

6、检测孟鲁司特对CCI大鼠脊髓背角NF．1出p65表达的影响免疫组化染色显示：NF．1cBp65在脊髓胞浆中和胞核中均有表达，与假手术组相比，CCI模型组大鼠脊髓细胞核NF．KBp65的表达显著增多，而孟鲁司特的低、中、高剂量组NF．1出p65蛋白的核转位均显著减少。6．孟鲁司特对CCI大鼠脊髓背角小胶质细胞p38MAPK磷酸化和NF—KBp65活化的影响免疫荧光化学双标检测发现：CCI手术后14天，模型组Ibal(红染)和p．p38MAPK(绿染)双阳性细胞数量显著增多，并且Ibal(红染)和NF—KBp65(绿染)双阳性细胞数量也明显增多；而孟鲁司特的低、中、

7、高剂量组小胶质细胞p38MAPK的磷酸化和NF．KBp65蛋白的表达均显著降低。结论孟鲁司特能够显著抑制CCI大鼠脊髓背角小胶质细胞p38MAPK磷酸化和NF．KBp65活化，减少促炎细胞因子IL。1p、IL．6和TNF-cc的分泌，从而发挥拮抗CCI大鼠神经病理性疼痛的效应。关键词孟鲁司特；CCI；神经病理性疼痛；细胞因子；NF—KB徐州医学院硕士学位论文AntagonisticeffectsofmontelukastonneuropathicpaininratsandrelevantmechanismsAbstractObjec晰eTheaimofthiss

8、tudywaSt0obs