荧光定量聚合酶链反应结合传统方法检测泌尿生殖道支原体感染的临床分析

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1、荧光定量聚合酶链反应结合传统方法检测泌尿生殖道支原体感染的临床分析钟欣(四川省内江医科学校四川内江641000)【摘要】目的探讨荧光定量聚合酶链反应结合传统方法检测泌尿生殖道支原体感染的临床价值。方法对我院皮肤科、泌尿外科、妇科就诊患者的泌尿生殖道标本115例行荧光定量聚合酶链反应、液体培养法检测，分析比较结果。结果通过对同种标本的2种方法结果的比较，检测阳性率的差异没有统计学意义；FQ—PCR呈阳性的标本，液体培养法均呈阳性；而液体培养法呈阳性的标本，FQ-PCR可能为阴性，考虑原因主要是液体培养时间过长，标本被污染，导致假阳性。结论液体培养法可作为泌尿生殖道支原体感染的初筛检查

2、，结合FQ-PCR检测能提供准确的诊断，2者阳性的基础上结合液体培养法的药皱试验，能为临床治疗提供有价值的用药方案。【关键词】荧光定量聚合酶链反应液体培养法泌尿生殖道支原体【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2012)33-0097-02解月尿支原体(Uu)和人型支原体(Mh)是泌尿生殖道支原体感染的主要致病菌，是引起非淋菌性尿道炎的常见病原体，是我国性传播疾病Z首[1,2]o治疗不及时可导致慢性前列腺炎、附睾炎、阴道炎、宫颈炎、子宫内膜炎及不育等多种泌尿生殖道疾病。目前临床上诊断泌尿生殖道支原体感染主要是根据支原体检验培养结果，目前国内的检测方法

3、主要是液体培养、固体培养法及PCR检测等,最常用的是液体培养，但其存在假阳性率高的问题，为探讨如何准确及时的诊断泌尿生殖道支原体感染，使患者及时得到治疗，我们对我院口5例临床标本行Uu一Mh二合一液体培养和荧光定量聚合酶链反应(fluorescencequantitativepolymerasechainreaction,FQ-PCR)检查，进行结果的分析比较,报告如下。1临床资料和方法1.1一般资料：标本来自2011年1月・2012年12月我院皮肤科、泌尿外科、妇科就诊患者的泌尿生殖道标本门5例，其中男89例、女26例，患者近期内未使用过任何抗生素。标本采集方法：女性患者清除阴道

4、口及宫颈口后，用无菌拭子插入宫颈口内l-2cm,停留2・3S后轻旋转取岀含上皮细胞的标本，置入无菌试管中；男性消毒尿道口后，用尿道拭子取尿道内M2-3cm处的柱状上皮细胞，置入无菌试管中。1.2检测方法1.2.1液体培养法：将采集的标本放入试剂盒的肉汤培养基中充分振洗后，再转种于液体培养基中，置入36.5°C温箱中，增菌24・48h后，根据试剂盒说明的方法，观察结果，培养液由浅黃色变为红色，即阳性，保持澄清未变色为阴性，对阴性标本继续培养24〜48h；如果培养液混浊表示污染，给予重新培养。1.2.2FQ-PCR检测方法：严格按照试剂盒指示的步骤进行，将标本洗涤到含lml生理盐水的专

5、用试管，离心机给予15000r/min离心10分钟，弃上清液，将沉淀物加40μl标本处理液裂解液重悬；煮沸5min,行12000r/min离心2min,取4μl上清液于200μl反应管中，分别加入各种FQ—PCR试剂，设置阳性对照和阴性对照，离心5・10秒后置入扩增仪，设定好相关参数，经过变性、退火及延伸共32个循环结束反应。由电脑自动分析得出基因拷贝数，阳性标准为：≥500copies/μL1.3统计方法：实验数据使用SPSS14.0统计软件进行分析，计数资料采用检验，以P<0.05为标准，差异有显著性。2结果2.12种不同检测方法的比较：具体

6、见下附表1,可见液体培养法的检出率较FQ—PCR高，经过检验，差异没有统计学意义，P>0.05o其中59液体培养阳性的标本，56例FQ—PCR阳性、3例阴性;56例FQ—PCR阳性的标本,液体培养法均呈阳性。附表12种不同检测方法的结果2.2液体培养阳性患者的FQ-PCR检测结果：具体见下表，可见59例液体培养法呈阳性的标本中，有56例培养时间≤48h,FQ—PCR均呈阳性，3例培养时间>48h,FQ-PCR均呈阴性，经过比较，差异具有统计学意义。附表2液体培养阳性患者的FQ—PCR检测结果3讨论解腺支原体(Uu)和人型支原体(Mh)可以引起广泛的泌尿生殖感染，从

7、而导致一系列泌尿生殖道不良后果［3］。临床上对检测支原体感染的诊断标准是解月尿或人型支原体常规培养法，目前临床上多用的是Uu-Mh二合一液体培养法，其优点还在于能做相关药敏实验，指导临床用药。但是支原体常规培养法会受到一定因素的限制，常规培养法的培养基来源困难，配制程序繁琐，不易长时间保存，培养步骤较多，培养周期较长。液体培养基中含有用于鉴别Uu的尿素、用于鉴别Mu的精氨酸以及指示剂酚红，支原体感染的标本中，含有相应的酶分解底物，能使pH值提高而产生颜色变化，当培养液