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1、苦豆子提取物体外抗肿瘤及抗紫外线辐射作用的研究栾迎春王兵张秀丽(河南濮阳中原油田总医院烧伤整形美容科河南濮阳457001)【中图分类号】R64【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)1-0218-03【摘要】目的探讨苦豆子提取物的抗肿瘤及抗紫外线辐射作用。方法采用MTT分析法检测苦豆子水提物及醇提物对人肝癌细胞株Bel-7402及小鼠B16黑色素瘤细胞株的体外抑制作用，采用紫外线照射后的小鼠成纤维细胞株L929细胞，检测此两部分对细胞的保护作用。结果苦豆子醇提物及水提物对肿瘤细胞均具有抑制作用，与正常对照比，有显著性差异(P<0.01)；在紫外线损伤过程中，
2、苦豆了醇提物及水提物在低浓度0.063mg/mk0.125mg/ml时对L929细胞出现明显的保护作用，与未加药的紫外对照组比，有显著性差异(P<0.01)；紫外线损伤后，苦豆子醇提物在低浓度0.063mg/ml时对L929细胞击现明显的保护作用，与未加药的紫外对照组比，有显著性差异(P<0.01)o结论苦豆子醇提物及水提物体外具有抗皮肤肿瘤及抗紫外线辐射作用。【关键词】苦豆子提取分离MTT分析法紫外线苦豆子(SophoraalopecuroidesL.)是豆科槐属植物,属多年生草本植物，广泛分布于我国新疆、甘肃、青海、宁夏、内蒙古等西部省区，味苦性寒,具有清热解毒、祛风燥湿
3、、止痛杀虫、平喘止咳等作用[l]o临床用于治疗痢疾、疮凉、外伤化脓、湿疹、顽癣、滴虫及胃病等各种疾病，近年来研究发现，具有抗癌作用[2、3、4、5、、6、7],如全身用药治疗恶性葡萄胎、抗小鼠淋巴瘤及乳腺癌作用⑻、对人红白血病细胞株K562、肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用等⑼，但目前还未发现苦豆子对皮肤肿瘤及抗紫外线方面的系统报道。故木试验釆用MTT分析法对苦豆子体外抗皮肤肿瘤及抗紫外线辐射的作用进行探讨。1材料及方法1.1药物苦豆子(购自药店，由我院中草药专家鉴定)，采用传统方法分别用去离子水和95%乙醇反复提取，得到水提物和醇提物,4°C冰箱保存待用；顺钳（山东齐鲁制
4、药厂，批号:20060104）o1.2肿瘤细胞株人肝癌细胞株Bel-7402；小鼠B16黑色素瘤细胞株；小鼠成纤维细胞株L929（以上细胞株均购自协和医科大学细胞库）。1・3试剂、主要仪器MTT（Sigma公司，批号:20060102）；胰蛋白酶（Merck公司，批号：20060220）；96孔板（Costar公司）；0.22um的滤器（Pall公司）；胎牛血清（河北汇丰生物技术研究所）；所用其它试剂均为分析纯（北京化工厂）;XSP-D型倒置显微镜（重庆光学仪器厂）；SHB-III循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸公司）；RE・52旋转蒸发仪（上海亚荣仪器厂）；BMGPOLA
5、RSTAR-OPTIMA多功能酶标仪（德国）；TC2323型C02细胞培养箱（美国SHELLAB公司）；TS-1型脱色摇床（江苏医用仪器厂）；超静工作台（北京昌平空气净化公司）。1.4方法1.4.1对Bel-7402及B16细胞株的体外抑制作用参照文献[10],常规培养细胞，待细胞进入对数生长期后，用0.25%的胰蛋白酶消化细胞，然后用含10%小牛血清RPMI1640培养基调整细胞浓度为l×105/mL,接种于96孔培养板，每孔100uL,用10%小牛血清RPMI1640按2mg/mL的浓度稀释提取物，微孔滤膜过滤后每孔加入lOOuL,初浓度为2mg/mL,对倍稀
6、释四个浓度，终浓度为0.25mg/mL,顺钳根据其IC50值计算，设置浓度为62.5ug/mL作为阳性对照，各浓度均设6个复孔，并设空白对照和细胞对照。置于37°C,5%CO2培养箱中培养48h,培养结束前4h,各孔加入MTT（5mg/mL）10uL,培养结束后，每孔弃去lOOuL培养基原液，加入10%的SDS-O.OlNHCLIOOuL,脱色摇床震荡10min后放置过夜，用酶标仪检测各孔在570nm处的吸光度值，空白调零，并计算抑制率。其计算公式为：抑制率二（对照组吸光度值一试验组吸光度值）/对照组吸光度值×100%o1.4.2对紫外线损伤过程中的L929细胞的
7、保护作用参照文献[11],常规培养L929细胞，待细胞进入对数生长期后，用0.25%的胰蛋白酶消化细胞，然后用含10%小牛血清RPMI1640培养基调整细胞浓度为l×106/mL,接种于96孔培养板，每孔lOOuL,用10%小牛血清RPMI1640按0.5mg/mL的浓度稀释提取物，微孔滤膜过滤后每孔加入lOOuL,初浓度为0.5mg/mL,对倍稀释四个浓度，终浓度为0.063mg/mL,每浓度6复孔，并设细胞对照组、未加药紫外对照组，孵育12小时。用辐射强度为2×10-3J/c
