血红蛋白电泳及临床意义

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1、血红蛋白电泳及临床意乂咎昕(黑龙江省鹤岗市人民医院154101)【关键词】血红蛋白电泳临床意义【中图分类号】R443+.8【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)30-0164-01血红蛋白电泳可以将血红蛋白中各正常成分或异常成分分离，以便进一步鉴定或定量测定。用等电聚焦毛细管电泳(CIEF)和区带电泳(CZE)可分离出十几种Hb变异链，有作者釆用CZE法对正常人和地中海贫血患者血液样品在pH11.8碱性磷酸盐缓冲液(PBs)中进行分离，分离的速度很快(<8分钟)，两者的电泳图谱明显不同⑴。对胎儿红细胞处理后，分离其血红蛋白，可分离djα>&beta

2、;和γ几种球蛋白链，如采用低pH3.2的缓冲液，虽然分析时间延长，但变异体的分辨效果更佳。显然CE技术对鉴别诊断血红蛋白病起重要作用。1材料与方法1.1检测对象收集2011年1月〜2012年12月受检300例均为门诊进行婚前检查或前前检查人员。其中男60例，女240例，年龄22〜35岁，平均为29岁。1.2方法电泳槽中的阳极注入pH9.1的Tris缓冲溶液，阴极注入PH8.6的巴比妥缓冲溶液，要求两极液面尽量成同一水平。把醋酸纤维素薄膜裁成4cm×12cm大小，浸入薄膜浸泡液中lOmin左右，取出，用滤纸吸去多余浸泡液，把薄膜粗面朝上，贴在电泳槽支架上，用两层纱

3、布搭桥，不接通电源，自由平衡5mino用血红蛋白吸管吸取2〜3μ浓度为180〜100g/L的血红蛋白溶液，放在盖玻片边缘(盖玻片长约lcm),把血红蛋白液用盖玻片印在醋酸纤维素薄膜靠阴极一端约1.5cm处(薄膜下衬一片干燥滤纸,吸去多余的血红蛋白液),同时用正常人血红蛋白液作对照。接通电源，平衡5min,电压调至150V,电流量约为0.2mA/cm簿膜宽，电泳15〜20mino电泳完毕后，取下薄膜条，置于氨基黑10B染色液里染色lOmin,取出，用漂洗液漂洗，换液数次，直至薄膜条洁白为止。2结果在pH8.6或pH8.8电泳吋，正常人的血红蛋白A及血红蛋白A2都向正极方向泳动，血红

4、蛋Ha在前，血红蛋白A2在后。但血红蛋Hf与血红蛋Ha的位置很靠近，难以准确地分离和定量，可作lmin碱变性试验，来测定血红蛋白F。300例血红蛋白电泳结果中检验异常96例，HbA2的平均值为2.3%；范围在1.1%〜3.2%之间。HbA2增高是β■轻型地中海贫血的一个重要特征。缺铁性贫血及其他血红蛋白合成障碍性疾病。3讨论异常血红蛋白分子的结构改变使其等电点发生变化，在电泳吋其泳动速度与正常血红蛋白不同。一般用以检出各种异常血红蛋白的主要电泳方法是在pH8.6或pH8.8条件下进行，有吋需要用pH7.0、6.8、6.5或6.25的条件作进一步的鉴别。作为电泳支持物可采用层析

5、滤纸、醋酸纤维素薄膜、淀粉胶、淀粉板或琼脂胶，不同支持物的电泳各有其特点，可根据需要选择。在pH8.6或pH8.8碱性缓冲液中电泳时，各种血红蛋白都向阳极泳动，按其泳速可大致分为6组。血红蛋白E：血红蛋白E泳速与血红蛋白A2相等。在患者的血红蛋白中血红蛋白E的含量超过20%。虽然血红蛋白C的泳速与血红蛋白A2很接近，在此电泳中不能分离，但可进一步作pH6.25琼脂电泳加以区别，这吋血红蛋白E与血红蛋AA2电泳位置相同，而与血红蛋白C分离。血红蛋白S在碱性条件下，电泳速度与异常血红蛋白S相同或接近的异常血红蛋白有血红蛋白D、血红蛋白G以及某些不稳定血红蛋白（如Zürich等），

6、但它们的镰变试验阴性及还原血红蛋白溶解度正常，而血红蛋白S的镰变试验阳性及还原血红蛋白溶解度降低，可加以区别［2］。血红蛋白G的泳速较血红蛋白D快。不稳定血红蛋白可进行热不稳定试验加以确诊。测定血红蛋白F是诊断重型和中间型地中海贫血的重要依据。淀粉板电泳可以分清血红蛋白F与血红蛋白A两条区带，定量测定结果与抗碱血红蛋白测定结果相似。血红蛋白H：进行电泳时,可以出现一条快速的异常血红蛋白区带，在pH6.5淀粉胶电泳中该区带仍向阳极移动，结合H包涵体阳性，可以确诊为血红蛋白H病。血红蛋白H的等屯点是pH5.6o在pH6.5或pH6.8的条件下，血红蛋白H向正极泳动，而其他血红蛋白则向负极泳

7、动，这对进一步鉴定血红蛋白H有特定意义。血红蛋白M经转变为氧化高铁血红蛋HM后，在pH6.8条件下可与血红蛋白A分开。利用pH6.8电泳，还可以分离血红蛋白E与血红蛋白A2及过筛不稳定血红蛋白。在pH8.6条件下，有几种异常血红蛋白的泳速相同或接近⑶。在pH6.25吋，可进一步区分。例如，将血红蛋HS与血红蛋白D及血红蛋白G分开；将血红蛋HC与血红蛋白0、血红蛋白E及血红蛋白A2分开；又可将血红蛋白0与血红蛋白C、血红蛋白E及血红蛋白A2分开。