探析翼状胬肉发病和凋亡机制之间关系

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1、探析翼状齊肉发病和凋亡机制之间关系摘要：目的：通过观察p53基因在翼状警肉组织中的表达，探讨翼状蔚肉的发病与凋亡机制之间的关系。方法:选择25例翼状鹫肉组织作为实验组，对照组选用正常眼鼻侧结膜组织，制作石蜡切片后常规HE染色和p53单克隆抗体免疫组化染色，实验数据进行秩和检验。结果：实验组中的p53蛋白含量显著高于对照组，两者差异有高度显著性(P0.05),具有可比性。选取警肉头颈部组织，包括表面结膜样组织，对照组选自正常眼鼻侧结膜组织，距角膜缘约1〜2mm,组织大小约3〜4mm。取材后即置入10%的甲醛溶液浸泡固定，常规脱

2、水、石蜡包埋。1.2石蜡切片的制作。从10%甲醛溶液中取出组织，流水冲洗过夜，依次采用乙醇梯度脱水，70%乙醇15s,80%、90%、95%、100%乙醇各3h,二甲苯透明3次，每次lOmin,从低熔点石蜡到高熔点石蜡浸蜡，共3次，每次lh。包埋，4um连续切片，每个石蜡块切4〜5张。1.3HE染色。将组织切片依次放入二甲苯脱蜡和95%乙醇各2次，每次lmin；蒸憎水冲洗2次，每次5min；苏木精染色液浸染lOmin；流水冲洗5min；0.5%伊红乙醇浸染2min；95%乙醇和无水乙醇脱水各2次，每次加in；滴中性树脂，加盖

3、玻片，光镜下观察翼状蔚肉组织的病理学改变。1.4免疫组化染色。切片脱蜡至水化，椽酸微波抗原修复15min,3%H202室温孵育lOmin,以消除内源性过氧化物酶活性。PBS浸泡3X5min,加入即用型鼠抗人p53单克隆抗体，4°C过夜，PBS冲洗3X5min,滴加生物素标记的二抗,室温孵育30min,PBS冲洗3X5min,每张切片滴加约50ul抗生物素-过氧化酶溶液，室温30minoPBS冲洗3X3mino滴加新鲜配制的DAE溶液显色3〜lOmino用自来水冲洗，苏木素复染，中性树胶封固。以PBS替代一抗作为阴性对照。阳性

4、对照片由福州迈新公司提供。1.5结果判断标准。以细胞浆内出现棕色或棕黄色颗粒为阳性染色，每张切片在高倍显微镜下(200倍)随机选择5个视野，计算每个视野阳性细胞率，取平均值作为该标本的阳性细胞率。根据阳性细胞数占上皮细胞的比例判断结果：0〜5%为阴性(-),5%〜25%为弱阳性(+),25%〜50%为中等阳性(++),>50%为强阳性(+++)。1.6统计学处理。采用SPSS11.0软件，将实验组与对照组的实验数据进行秩和检验。2结果2.1HE染色。2.1.1正常结膜的组织学表现。结膜分为上皮层和基质层。上皮层由3〜5层细胞

5、组成，表层为扁平细胞，中层为多边形细胞，基底层为立方形或柱形细胞。基质层为疏松结缔组织，其间有散在的毛细血管，少量成纤维细胞、淋巴细胞和中性粒细胞。2.1.2翼状捋肉组织的病理学表现。捋肉组织上皮层均可见不同程度的增生。上皮下组织可见成纤维细胞增生活跃、新生血管增多，在血管周围有大量炎性细胞浸润，有淋巴细胞、浆细胞和少量的中性粒细胞。2.2免疫组化染色。在翼状捋肉中，p53蛋白染色阳性细胞主要位于上皮细胞基底层。p53基因蛋白产物阳性反应呈棕黄色颗粒，在细胞核呈阳性表达。p53蛋白在两组中的表达，翼状鹫肉中的P53蛋白含量较

6、正常结膜高，两者差异具有高度显著性（P