鳜骨骼肌慢肌胚胎期发生与胚后生长发育

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1、学校代码：10264研究生学号：M090107274上海海洋大学硕士学位论文题目：鳜骨骼肌慢肌胚胎期发生与胚后生长发育Embryonicontogenyandpostembryonic英文题目：developmentofslowskeletalmuscleofmandarinfishSinipercachuatsi专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：水产动物遗传育种姓名：苌建菊指导教师：赵金良教授二O一二年三月二十日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文

2、，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索

3、，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注李思发上海海洋大学教授、博导主席中国水产科学院来琦芳研究员、硕导委员东海水产研究所崔映宇同济大学副教授、硕导委员颜标上海海洋大学讲师秘书2012年5月答辩地点水产与生命学院C217答辩时间25日上海海洋大学硕士学位论文鳜骨骼肌慢肌胚胎期发生与胚后生长发育摘要骨骼肌约占鱼体体重的

4、40–60%。骨骼肌由白肌（快肌）、红肌（慢肌）和粉肌组成。肌球蛋白是构成骨骼肌粗丝的主要成分，其结构由两条重链（MyHC）和两对轻链（MyLC）组成。与哺乳类不同类型肌纤维交叉分布不同，鱼类不同类型肌纤维有较明显的分区，不同类型骨骼肌的发育特征也不相同。MyoD是生肌调节因子MRFs家族的主要成员之一，是脊椎动物肌肉发育的主要调控基因，参与骨骼肌细胞形成与分化。为全面了解鳜（Sinipercachuatsi）骨骼肌的形成和发育特征，本论文开展了以下研究工作：采用RT-PCR、cDNA末端快速扩增法（R

5、ACE）技术分别克隆了鳜慢肌肌球蛋白重链S2和LMM区cDNA序列（长度分别为1938bp,1814bp），与本实验室前期克隆的S1序列（2520bp）进行拼接后，得到鳜慢肌肌球蛋白重链全长序列5891bp，其中，开放阅读框5751bp，3’端非翻译区140bp。鳜慢肌肌球蛋白重链与快肌肌球蛋白重链的核苷酸序列相似性为80%，氨基酸序列相似性为88%。根据所得到的cDNA序列分别设计快肌和慢肌特异性引物，合成地高辛标记的特异性RNA探针，通过原位杂交技术研究了鳜胚胎期慢肌与快肌的发生特征，结果表明，慢肌

6、在受精后32h开始发育，而快肌在受精后34h开始发育，慢肌的发育稍早于快肌。此外，还采用RT-PCR技术克隆了鳜慢肌和快肌MyoD基因的部分片段，通过NCBI比对发现，获得了2种慢肌表达类型的MyoD（sMyoD1、sMyoD2），而1种快肌表达类型的MyoD（fMyoD1）。鱼类快肌和慢肌分别占据骨骼肌的不同位置，表现不同的生长发育特征。为了解鳜慢肌纤维的胚后发育特征，制作了孵化后1-33日龄个体的石蜡切片，采用慢肌特异抗体的免疫组织化学染色技术，观察了背鳍起点处躯干横切面慢肌的发育变化特征，并利用图

7、像分析软件统计慢肌纤维的数目和面积。结果表明，孵化后慢肌位于水平肌隔附近，呈楔型，之后向背、腹两侧生长。孵化后1-9日龄慢肌为单层肌纤维，11日龄发育为多层肌纤维，19日龄慢肌覆盖侧线附近，33日龄慢肌延伸至背侧第2背肌节、腹侧腹部肌肉2/3处，并在水平肌隔和侧线处I上海海洋大学硕士学位论文分别形成两个慢肌群。位于骨骼肌最外层的扁平状表层细胞，可能为慢肌增生生长的主要来源。躯干单侧慢肌肌纤维数目由孵化后6个增加至315个，总面积从2213.18μm增加到7839.58μm，除孵化后13日龄的增生生长占优

8、势外，其他发育阶段，肥大生长一直占主导优势。关键词：鳜；慢肌；发生；发育；肌球蛋白重链；原位杂交；免疫组化II上海海洋大学硕士学位论文EmbryonicontogenyandpostembryonicdevelopmentofslowskeletalmuscleofmandarinfishSinipercachuatsiABSTRACTTheskeletalmuscleoffishaccountsforabout40-60%ofbodywe