葡萄细胞提取物的心肌保护和神经保护作用研究

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1、南开大学硕士学位论文葡萄细胞提取物的心肌保护和神经保护作用研究姓名：吕昕泽申请学位级别：硕士专业：药物化学指导教师：张卫2012-05中文摘要据WHO统计报道，心脑血管疾病是目前严重威胁人类健康的头号杀手，2008年1730余万死于心血管疾病，占死亡比例的30％，推瓣1J2030年，约2360万人将死于心血管疾病，它将仍是影响人类生存的最主要致死因素。同时随着人口老龄化的发展，神经退行性病变在人群中所占的比例也在逐渐增加，wH0报道现有接近3560万的痴呆症患者，预测到2030年这一数字将翻倍，达至1J6570万，到2050年将超过三倍达¨54

2、0万。鉴于报道葡萄中含有的白藜芦醇、花青素等多酚类物质具有抗心脑疾病的潜力，本课题就悬浮培养的葡萄细胞的提取物在心肌保护和预防老年痴呆方面的作用展开了研究。首先对植物细胞培养技术获得的葡萄细胞进行了有效成分的提取分离，建立并优化了微波法针对葡萄细胞的高效提取工艺，即以20％乙醇作为提取溶剂，料液比1：5，微波输出功率设定600W，提取最高温度75。C，微波提取2min可高效提取葡萄细胞中的白藜芦醇苷；同时确定了提取物的质量控制标准，粗提物分别经乙酸乙酯萃取、D101大孔树脂纯化和硅胶柱纯化可获得白藜芦醇苷含量分别达30％，50％，80％以上的葡

3、萄细胞提取物。其次，三种组分的葡萄细胞提取物分别针对H9c2和PCI2两株细胞进行心肌保护和神经保护的活性筛选，结果显示葡萄细胞提取物WE388在50pg／ml的较低浓度下对H202损伤的PCI2细胞具有显著的保护作用。最后，就VVE388的神经保护机制展开了研究。结果显示，与对照组相比，以VVE388预处理的细胞组。总,SOD活力较损伤组提高19倍左右，GSH含量较损伤组提升310／o-．q：3．7％。总SOD活力和GSH含量均显著提高，提示WE388可通过调控SOD活力和GSH的量来清除进入细胞内的过氧化物，抵抗H202产生的02‘一和·O

4、H对细胞造成的损伤而发挥神经保护作用，同时ROS积累实验也证明了这一点，以WE388预处理组的ROS积累量较H202损伤组显著降低了47．3％-士6．7％。同时凋亡实验研究发现WE388可降低H202损伤造成的PCI2细胞凋亡的比例。本课题的研究为今后开展更深入的药理实验，开发具有临床预防、治疗意义的药物及新资源食品认证奠定了基础。关键字：白藜芦醇，白藜芦醇苷，花青素，心肌保护，神经保护AbstractAccordingtotheWTOreports，cardiovasculardiseases(CVDs)aretheworld’sutmost

5、healththreatsandlargestkillers．Anestimated17．3millionpeoplediedfromCVDsin2008．representing30％ofallglobaldeaths．By2030，almost23·6millionpeopIewilldiefromCVDs，theseareprojectedtoremainthesingleleadingcausesofdeam．Meanwhileduetotheincreaseintheagingpopulation，neurodegeneratlVed

6、iseasescontinuetoinvolveagreaterpercentageofthepopulation．Worldwide，nearlv35．6millionpeoplelivewithdementia，thisnumberisexpectedtodoublebY2030(65．7million)andmorethantripleby2050(115．4million)·SincegrapepolyphenolswhichcontainedingrapessuchasresVeratrola11danthocyaninshavede

7、monstratedsignificantprotectiveactivitiesonCVDsthatcanbepotentiallyappliedforpreventiveandtherapeutictreatmentsofthesepatients，weusedtheextractsof／,Tt／sviniferacellstodosomeresearchesrespectivelyonmyocardialprotectionandnueroprotection．Firstlv’weextractedandseparatedtheeffec

8、tiveingredientsofV／tisviniferacells．setupandoptimizedahighefficiencymethodo