铁皮石斛多糖对高糖诱导地血管内皮细胞bax、bcl-2表达地影响

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1、·64·中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2015Jan；31(1)：64—7O网络出版时间：2014—12—413：45网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／doi／10．3969／j．issn．1001—1978．2015．01．015．html铁皮石斛多糖对高糖诱导的血管内皮细胞Bax、Bcl一2表达的影响张贝贝，刘文洪，李俊峰，叶志青(浙江中医药大学生命科学学院，浙江杭州310053)doi：10．3969／j．issn．1001—1978．2015．01．015导的血管内皮细胞NF-KB因

2、子的过量表达有较好文献标志码：A文章编号：1001—1978(2015)01—0064—07的抑制作用，提示其可能对糖尿病血管病变具有保中国图书分类号：R284．1；R322．123；R329．25；R587．106；护作用。R587．2糖尿病对机体的危害源于糖尿病并发症，尤其摘要：目的优化铁皮石斛多糖提取工艺，研究其对高糖诱是糖尿病血管并发症l，糖尿病血管并发症是人类导的静脉血管内皮细胞(HUVEC)的保护作用机制。方法致死、致残的重要原因。内皮细胞受损被认为是血在单因素实验基础上，利用响应面法优化多糖的提取工艺；体外培养HUVEC细胞，将对数生长期的细胞分为空

3、白对照管病变的首要步骤。近年来国内外研究都证实高糖组、正常血糖组、高糖刺激组和不同铁皮石斛多糖浓度+高可以诱导内皮细胞凋亡』，促发活性氧自由基糖刺激组，分别作用24和48h后，采用MTF法检测的HU—(ROS)的生成J，影响Bax，Bcl-2等基因表达，诱导VEC凋亡的影响，用RT—PCR法检测内皮细胞Bax、Bcl一2的细胞凋亡¨。表达情况。结果铁皮石斛多糖提取的最优条件为：提取次铁皮石斛的市场需求持续旺盛，但其野生资源数为2．8次，液(mL)料比(g)15．75：1，提取时间2h，在此有限，加之铁皮石斛生活环境不断遭受破坏，导致铁条件下，理论计算提取率达到25

4、．1％，实测提取率为皮石斛野生资源濒临灭绝，无法满足市场需求。因24．9％，与模型高度拟合。与正常组相比，高糖组抑制细胞此，提高铁皮石斛多糖提取率，充分利用现有的药的生长，增强Bax的表达，抑制Bcl一2的表达，在高糖诱导下，材，是值得关注的，故本试验采用响应曲面法探讨铁铁皮石斛多糖促进细胞生长，抑制Bax的表达，增强Bcl一2的表达。结论通过响应面法优化的工艺，得率高，提取效果皮石斛多糖的最佳提取工艺条件，以期从工艺上提好。铁皮石斛多糖可通过抑制高糖诱导的血管内皮细胞高药材的使用效率。同时，铁皮石斛已经成为一种Bax的表达，增强Bcl一2的表达，从而抑制血管内皮

5、细胞凋广受关注的保健用品，探讨其对一些疾病，尤其是慢亡，在一定程度上可防治糖尿病血管病变。性病的作用机制具有较好的研究价值，实验采用细胞培养及分子生物学技术，研究铁皮石斛多糖对高关键词：铁皮石斛；多糖；响应面优化；糖尿病；内皮细胞；糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响及其Bax；Bcl-2Bax、Bcl-2的表达干预情况，从体外实验的角度探讨铁皮石斛多糖防治糖尿病血管病变的机制。铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKimuraetMigo，1材料与方法DOP)是我国传统名贵中药材，具有益胃生津、滋阴1．1材料铁皮石斛原球茎，由浙江中医药大学生清热等

6、功效，多糖是其主要活性成分J。研究发命科学学院提供；人脐静脉内皮细胞系HUVEC由现，铁皮石斛多糖体外能促进脾细胞增殖，增加自然浙江中医药大学生物与制药工程实验中心惠赠。杀伤性细胞和巨噬细胞活性；体内具有免疫调节1．2主要试剂葡萄糖、苯酚、浓硫酸、DMEM高糖活性，且不同分子量的多糖具有不同的免疫调节活培养基(Gibco，批号：H2387)、胰蛋白酶(1：250，性，促进干燥症病人唾液分泌，促进毛发生Gibco，批号：2750018)、胎牛血清(杭州四季青公长等作用。有文献报道，铁皮石斛多糖对高糖诱司)、TRIzol(Invitrogen公司)、RT—PCR试剂盒

7、(北京收稿日期：2014—09—02，修回日期：2014—10—20鼎国昌盛生物技术有限责任公司)。其余试剂为国基金项目：国家自然科学基金资助项目(No31270051)；浙江省中医产分析纯。药研究计划项目(2009CA003)，浙江省教育厅重点项目1．3实验分组共分6组。A组(空白组)：新鲜(No201121522)DMEM培养基；B组(高糖刺激组)：新鲜DMEM培作者简介：张贝贝(1989一)，男，硕士，研究方向：生物化工，E．mail：934889216@qq．oom；养液+葡萄糖22mmol·L～；c组(正常血糖组)：刘文洪(1975一)，男，硕士，副教授

8、，研究方向