牛支原体遗传稳定性初步研究

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1、西南大学硕士学位论文牛支原体遗传稳定性初步研究姓名：张利申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：王健；黎晓敏20120601摘要牛支原体遗传稳定性初步研究临床兽医学硕士研究生张利指导教师王健黎晓敏教授摘要牛支原体(M阳叩细册口6D协)作为感染牛的一种重要的致病性支原体，可以引起包括肺炎、乳腺炎、关节炎、生殖道损伤以及结膜炎等在内的多种疾病，同时还可与其他病原协同，造成继发感染。目前，国内外关于牛支原体的研究主要集中在病原的免疫及核酸鉴别诊断方面，国外研究较为深入；国内研究却处于起步阶段，这主

2、要和我国牛支原体流行较晚、规模不大，病原学和血清学数据不够充分，缺乏流行病学研究资料，分离鉴定的菌株数量和种类少，鉴定方面缺乏足够的参考菌株和技术标准等有关，关于牛支原体遗传稳定性的研究报道较少，几乎为空白．为了临床上预防和控制牛支原体及其支原体病奠定理论基础，以及为安全稳定的疫苗研发提供参考依据，本课题初步对筛选的三个牛支原体菌株进行了遗传稳定性研究，主要内容有：l牛支原体菌落形态观察通过观察筛选的不同地区的三个牛支原体菌株的显微结构，研究表观遗传稳定性。结果：牛支原体在前几代生长中，出现典型

3、菌落即“煎蛋样”且相对稳定，随着传代时间推移，形成越来越多的中央蛋黄结构缺失的“煎蛋样”菌落，显示出表观遗传不稳定．2牛支原体生长情况研究通过颜色变化单位(CCU)和pH值变化情况研究牛支原体的遗传稳定性。结果：颜色变化单位除w70总体波动不大外，其他两个菌株均出现较大波动；三个菌株pH值统计分析均为0．0l

4、沙星的MIC值为4～8ug／mL，红霉素的MIC值为2～4呦nL，诺氟沙星的MIC值在8．16u咖L之间。表明：牛支原体对红霉素的耐药性最低，其次是恩诺沙星、诺氟沙星，对环丙沙星的耐药性最高。I西南大学硕十学位论文通过在添加有最低抑菌浓度的基础培养基上观察牛支原体的颜色变化单位，反映牛支原体的生长情况，从而研究牛支原体的遗传稳定性。结果：牛支原体传代培养一定时间出现耐药性，显示出遗传不稳定。因此，在临床防治牛支原体病时要注意避免同种药物的长期使用，以避免耐药性的产生．4牛支原体单链构象多态性分析

5、(PCR-SSCP)首先采用柱式液体样品总核酸抽提试剂盒统一提取每个菌所有代次的基因组DNA，保证试验条件的一致；然后通过牛支原体特异性片段oppD／F及16srRNA进行基因组DNA纯度、完整性鉴定；最后运用单链构象多态性(SSCP)分析法对牛支原体16srRNA片段进行分析以初步探讨遗传稳定性。结果：oppD／F特异性片段和16srRNA片段PCR鉴定证明所提取基因组DNA纯度高、完整性好：单链构象多态性分析16sd州A，均得到有良好重复性的清晰的单链条带。初步显示出牛支原体遗传稳定。。综上

6、所述，对牛支原体的表型(菌落形态、生长情况、耐药性)观察，与一些学者报道的结果一致，即遗传不稳定；对牛支原体进行保守片段单链构象多态性分析，初步显示出遗传稳定。关键词：牛支原体遗传稳定性初步研究IIABSTRACTPreliminaryresarchongeneticstabili够n1●0tmVCODIaSmaDOVlSMastercandidate：ZhangLiAdvisor：Pro．W撕gJianAbstractMycopl缀MboVis，笛0neoftlleimpona呲p抽ogen0

7、fcaltle，c锄c叭∞pne啪on斌mst施，amlritis，gerIital仇IctiIlju叮舔well笛conjunctivitis柚doⅡlerdi∞越es，als0c卸Sc辩conda呵i11I‰tionwi廿lotlIerp砒og∞．Atp他scllt’thes￡udyaboutMycopl舔mab0Vismainlyf如璐锄mepathogelliciI如哪u∞柚dnucleicaciddiagnosis，f0他ign他searchisdeeper．Domesticsmdyi

8、sinthein矗mcy，笛itspopuI嘶islace'scaleissmall，aetiological锄dserologicalda：taisirIsu髓cie鸭epidemiologicalstudyislacl(，isolatedsn毽i璐islaclc，re佬rencestrai璐柚d妣hnicalstan(Iardsarcalsol∞k's0廿lereport0ntllegeneticstat)il时ofMycopl弱maboVisisless，almostablaIll【．In