捻转血矛线虫抗伊维菌素虫株p-糖蛋白基因多态性研究

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1、分类号S852.7学校代码10129UDC11.220学号2009201083捻转血矛线虫抗伊维菌素虫株P-糖蛋白基因多态性研究ThestudyonpolymorphismofP-glycoproteingeneinIvermectinresistancestrainsofHaemonchuscontortus申请人：刘鑫远学科门类：农学学科专业：预防兽医学研究方向：家畜寄生虫学指导教师：杨晓野教授论文提交日期：二〇一二年五月摘要羊胃肠道线虫对驱虫药的抗药性已成为全世界面临的严重问题，其中以捻转血矛线虫（Haemonchuscontortus）的抗药性危害最甚。然而，我国在这方面的研究相对较

2、少，鉴于目前羊生产实践中寄生虫病防治的需要，本课题从以下三个方面对抗药性捻转血矛线虫的P-糖蛋白基因进行了研究，结果如下：（1）以羊捻转血矛线虫抗伊维菌素虫株、抗阿苯达唑（丙硫咪唑）虫株和敏感虫株为研究对象，分别扩增其P-糖蛋白基因的部分片段，将所得片段克隆后测序，并进行分析。结果表明，捻转血矛线虫P-糖蛋白基因片段在敏感株之间的同源性较高，达99.1%，而具有抗性的P-糖蛋白基因片段与敏感株的同源性则较低，在80.2%～93.0%之间，且有多处核苷酸发生了突变。经对片段中的两段开放阅读框翻译后分析，发现抗伊维菌素虫株、抗阿苯达唑虫株与敏感虫株相比，第6个氨基酸位点均由谷氨酸（Glu,E）突

3、变为缬氨酸(Val,V)。（2）以羊捻转血矛线虫抗伊维菌素虫株为研究对象，根据P-糖蛋白基因中的一段开放阅读框设计引物，运用PCR-SSCP方法分析该片段的多态性，并分别测定不同基因型的基因序列。结果表明，两种基因型中ORF的序列虽然有四个碱基发生了突变，但翻译后的氨基酸序列则完全相同；与敏感株相比，所有受检虫体的第6个氨基酸均由谷氨酸（Glu,E）突变为缬氨酸(Val,V)，说明该突变在抗伊维菌素虫株中普遍存在。（3）以羊捻转血矛线虫抗伊维菌素虫株和敏感株虫体为研究对象，运用PCR-RFLP方法进行分析。结果表明，捻转血矛线虫伊维菌素敏感株虫体P-糖蛋白基因PCR产物不能被内切酶KpnI切

4、开，而抗伊维菌素虫株虫体PCR产物则可被内切酶切开；酶切后统计数据显示，10条敏感株虫体全部为敏感纯合子（BB）；在所检测的20条抗伊维菌素株虫体中，抗性纯合子（AA）6个（30%），杂合子（AB）13个（65%），敏感性纯合子（BB）1个（5%）。其中，AB基因型频率最大，为优势基因型，其次为AA型，BB型比例最低。抗性等位基因A为优势基因，其频率为62.5%，敏感等位基因B的频率为37.5%。关键词：捻转血矛线虫；抗药性；P-糖蛋白；PCR-SSCP；PCR-RFLPThestudyonpolymorphismofP-glycoproteingeneinIvermectinresista

5、ncestrainsofHaemonchuscontortusAbstractTheanthelminticresistanceofsheepgastrointestinalnematodeshasbeenaseriousproblemintheworld,amongwhichresistanceofHaemonchuscontortusistheworstone.ButthestudyinthisareawaslessinChinaanditwasalsonecessarytothecontrolofparasiticdiseasesinsheephusbandry.Threeaspect

6、sofP-glycoproteingeneofHaemonchuscontortuswithdrug-resistantwerestudiedinthispaper.Theresultswereasfollows:（1）WithHaemonchuscontortusofIvermectin-resistant、Albendazole-resistantandsensitivestrainsfromsheepassamples,partialsequenceofP-glycoproteingenehadbeenamplification,followedbycloningandsequenci

7、ng.TheresultshowedthatthehomologyofP-glycoproteingenewashigherinsensitivestrains,anditcouldbeupto99.1percent.ButthehomologyofP-glycoproteingenebetweentheresistantstrainsandthesensitivestrainswaslower,whichw