宁夏灵武白芨滩国家级自然保护区苦豆子内生真菌多样性及其抑菌活性物质研究

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1、宁夏大学硕士学位论文宁夏灵武白芨滩国家级自然保护区苦豆子内生真菌多样性及其抑菌活性物质研究姓名：郝丽申请学位级别：硕士专业：农业昆虫与害虫防治指导教师：顾沛雯201203摘要一一植物内生真菌普遍存在于目前发现的各种陆生及水生植物中，其多样性受多种因素的影响。不同的区域或位点、气候条件、植被等均可影响内生真菌类群的多样性。研究发现，药用植物中蕴含着大量的有益内生真菌，这些内生真菌与宿主之间具有紧密的生态关系，其产生的次生代谢产物在医药、植物病虫害生物防治等方面的用途逐渐增大，成为寻找新的天然活性产物的重要方向。本文以宁夏干旱荒漠区重要

2、的沙生药用植物苦豆子为研究对象，进行了内生真菌的分离鉴定、多样性分析以及抑菌高活性菌株的筛选研究，结果如下：1、从采自宁夏干旱荒漠区的6种沙生药用植物苦豆子(SophoraalopecuroidesL)、老瓜头(Cynanchumkomarovii)、脓疮草(Panzeriaalaschanica)、甘草(Glycyrrizauralensia)、沙冬青(Ammopiptanthusmongolicus)、乳浆大戟(Euphorbiaesula)中共分离内生真菌449株。以根部最多，其次茎部，叶部最少。合并形态相同分离物，苦豆子佤a

3、lopecuroidesL)中分离属最多，为16个属。除无孢菌外，镰孢霉属(Fusarium)为6种沙生药用植物内生真菌共有属，匐柄霉属(Stemphylium)、短梗霉属(Aureobasidium)、芽枝孢属(Cladosporium)、茎点霉属(Phoma)和毛壳菌属(Chaetomium)仅在苦豆子中分布。2、从宁夏灵武白芨滩国家级自然保护区5个样区采集的野生苦豆子植株中共分离出内生真菌214株，根部分离内生真菌最多，占45．3％。不同样区间，以苦豆子、甘草、白草、蒙古冰草、短花针茅等为主的沙生植被草原(II和IV)，由于植

4、被覆盖度高(>50％)，伴生植被类型丰富，苦豆子内生真菌感染率和分离率最高。苦豆子内生真菌群落相似系数最高的是以丛生小禾草小灌木等植被为优势种群的荒漠草原(I)和以强旱生小灌木植被为优势种群的荒漠草原ftID，两者均以苦豆子为伴生植被，苦豆子内生真菌群落相似系数CS值为O．76，其它各样区间苦豆子内生真菌群落相似系数在0．50--0．72之间。3、用6种靶标病原菌对214株苦豆子内生真菌进行初步拮抗真菌的筛选，有167株(占78．0％)苦豆子内生真菌表现出不同程度的抑菌活性，其中样区V拮抗菌株数比例最高，达97．5％，其次是样区I，

5、为89．4％，最低为样区IⅡ，仅为64．7％。拮抗菌株抑菌带从5mm一21ram不等，显示出活性菌株的抑菌作用强度不同。其中BKDF3菌株胞外分泌物的抑菌活性最为显著，对番茄枯萎病菌的抑菌带宽度达到17．82mm，产生的抑菌物质可以通过硫酸铵盐析得到，表明抑菌物质中含有蛋白质。4、用薄层色谱法(thinlayerchromatography，T蚴对64株具有抑菌活性的内生真菌菌株进行产喹诺里西啶碱菌株的筛选，并对其进行初步鉴定。结果表明5株苦豆子内生真菌菌株发酵液层析带与苦豆子总碱的层析带迁移率相当，初步判定为产喹诺里西啶生物碱菌株

6、，经形态学鉴定，5株菌株分属于卵形孢霉属(Oospora)、头孢霉属(Cephalosporium)、地霉属(Geotrichum)和亚大茎点霉属(Macrophoming)。关键词：苦豆子，内生真菌，多样性，抑菌活性AbstractEndophyticfungiwerewidespreadintheallkindsofterrestrialandaquaticplantswhichhadcurrentlybeenfound．Itsdiversitywasinfluencedbymanyfactors．Differentareaso

7、rsite，climateconditions，vegetation，etcallcallaffectthediversityoftheendophyticfungigroups．Researchshowedthatmedicinalplantscontainalargenumberofbeneficialendophyticfungiwhichhascloseecologicalrelationshipwiththehost．Thesecondarymetabolitesproducedbytheplantendophyticfu

8、ngihadgottenmoreandmoresignificantapplicationinmedicine，plantdiseasebiologycontrols，etcandbecometheimportantdirection