内蒙古牙克石地区啮齿动物携带汉坦病毒分子流行病学调查研究

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1、分类号：密级：无学号：2009108002单位代码：10759石河子大学硕士学位论文内蒙古牙克石地区啮齿动物携带汉坦病毒分子流行病学调查研究学位申请人从美丽张居农教授指导教师张永振研究员申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称动物遗传育种与繁殖研究方向动物繁殖技术所在学院动物科技学院中国〃新疆〃石河子2012年5月ThemolecularepidemiologyinvestigationofhantaviruscarriedbyrodentsinYakeshiareas,InnerMongoliaAutonomous

2、RegionADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByCongMei-li(AnimalGeneticsandBreeding)DissertationSupervisor:Prof.ZhangJu-nong,ZhangYong-zhenMay,2012石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是

3、在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密

4、的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要目的：我国是肾综合征出血热病例报道最多的国家，在我国存在多个肾综合征出血热疫区。1955年，在内蒙古牙克石地区发现首例肾综合征出血热病人，随后疫情不断扩大，病例逐渐增多。1984年在牙克石建立疫情监测点，多年监测数据表明牙克石疫区的性质有所转换，我们利用分子生物学方法检测当地啮齿动物携带汉坦病毒情况，为更好地开展肾综合征出血热预防控制工作提供科学依据。方法：在牙克石地区采用夹夜法捕获啮齿动物，利用形态学鉴定鼠种，现场解剖取其肺组织，迅速

5、置于液氮中。利用间接免疫荧光（IFA）和RT-PCR技术，检测啮齿动物中HV自然感染情况及其基因型别，用MrBayesv3.1.2软件构建系统发生树分析与其他HV基因型之间的关系。同时，提取HV检测为阳性标本的总DNA，扩增Cytb基因。结果：1）牙克石地区共捕获啮齿动物442只，经间接免疫荧光（IFA）检测，共发现6份黑线姬鼠鼠肺标本为HV抗原可疑阳性。阳性标本提取总RNA，Nested-PCR扩增L片段，所有阳性标本均未扩增到目的片段。2）莫氏田鼠52只（经IFA检测未见阳性）、鼩鼱6只，采用RT-PCR方法进

6、行检测。52份鼠肺标本提取总RNA，Nested-PCR扩增汉坦病毒L片段，共得到5条片段，均来自莫氏田鼠。核苷酸Blast结果显示为目的片段，设计引物扩增S、M片段。5份标本全部扩增到全S核苷酸序列和部分M核苷酸序列（Gc片段），其中2份扩增到全M序列。S基因片段由1848-1861个核苷酸组成，M基因片段由3662个核苷酸组成。同源性分析发现5株病毒与哈巴罗夫斯克病毒（KHAV）具有最高的同源性，S基因片段为92.5%-96.4%，M基因片段为88.9%-95.4%；但与其他型汉坦病毒的差异较大，S基因片段差异

7、大于21.5%，M基因片段大于25.2%。用全S与全M的核苷酸序列构建系统发生树，这些病毒均与KHAV聚集在一起，构成一个独立的分支。另外，所有已知的KHAV病毒又可以分为两个小的分支，两个病毒分支之间的核苷酸差异大于5.3%。3）阳性标本提取总DNA，PCR扩增线粒体Cytb基因（Cytochromeb），核苷酸序列比对结果与形态学鉴定结果一致，所有阳性标本均为同一鼠种，同为莫氏田鼠。构建系统进化发生树进行分析，5份阳性标本的Cytb基因与捕自俄国的莫氏田鼠的Cytb基因的进化关系最近。结论：牙克石地区莫氏田鼠中

8、汉坦病毒的携带率较高（9.62%），所携带的病毒均为KHAV，与俄罗斯远东哈巴罗夫斯克地区扩增到的病毒为同一基因型病毒。该结果支持莫氏田鼠是KHAV的自然宿主。捕获鼠类多为黑线姬鼠，但并未从标本中扩增到HTNV，推测牙克石地区的疫区性质可能已经发生改变，应加强对其他鼠类（如莫氏田鼠）和鼩鼱类动物的监测工作。关键词：莫氏田鼠；汉坦病毒；哈巴罗夫斯克病毒；系统进