靶向微泡评价兔睾丸缺血再灌注损伤的实验研究

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1、福建医科大学硕士学位论文分类号：R445.1学校代码：10392学科专业代码：105107学号：1210306092福建医科大学硕士研究生毕业论文靶向微泡评价兔睾丸缺血/再灌注损伤的实验研究Experimentalstudyonevaluatingtesticularischemia/reperfusioninjurywithtargetedmicrobubblesinrabbit学位类型：临床医学硕士所在学院：协和临床医学院研究生：袁芳学科、专业：影像医学与核医学导师：薛恩生教授研究起止日期：2012年9月至2013年4月答辩日期：2012年5月23日二

2、○一三年五月福建医科大学硕士学位论文福建医科大学硕士学位论文目录中文摘要……………………………………1英文摘要……………………………………3前言…………………………………………5材料和方法…………………………………6结果…………………………………………14讨论…………………………………………26结论…………………………………………29参考文献……………………………………30致谢…………………………………………32综述…………………………………………33综述参考文献………………………………38靶向微泡评价兔睾丸缺血/再灌注损伤的实验研究中文摘要目的检测自制普

3、通脂质微泡和靶向脂质微泡的物理学性质，评价靶向微泡在兔睾丸完全缺血/再灌注损伤中的应用价值。方法第一部分：制备普通脂质微泡和靶向脂质微泡将各种相关脂质材料按一定比例溶解于适量蒸馏水中，交替使用60℃水浴和超声波振荡至分散完全，通六氟化硫（SF6）气体，机械振荡至形成乳白色液体即制备好普通脂质微泡或生物素（biotin）化脂质微泡。生物素化脂质微泡经静置弃下清液纯化后，按一定比例加入亲和素(avidin)，继续静置弃下清液纯化后，按一定比例加入生物素化的P选择素抗体(Bio-P)，冰箱4℃保存备用。采用血细胞计数仪测量普通微泡和靶向微泡的粒径及浓度。采用FI

4、TC标记的二抗与携抗P-选择素抗体微泡结合，荧光显微镜下观察抗P-选择素抗体与微泡的连接情况。第二部分：30只成年健康新西兰大白兔随机分成：对照组（假手术组/S组）、缺血/再灌注组（IR组，IR组又分为0.5h组、1h组、2h组、4h组），每组6只。S组随机暴露一侧精索，4h后行MB和MBp的双侧睾丸造影。IR组随机选择一侧睾丸进行扭转手术，将术侧睾丸血流完全阻断4h后解除结扎，血流即刻出现，分别再灌注0.5h、1h、2h、4h。IR组在术前和术后行MB和MBp的双侧睾丸造影。CEU采用经耳缘静脉弹丸式注射法进行，每只实验兔注射(间隔20min)MB8和M

5、Bp约0.2ml/Kg(MB、MBp浓度5.0×10个/mL)，动态观察睾丸组织内造影剂充盈情况，经过5~10min循环时间待血池中循环微泡完全消失后，记录缺血再灌注睾丸及正常睾丸显影图像，全部声学造影图像存于机内，以备脱机分析。实验结束后处死实验兔，取术侧睾丸，10％甲醛固定，行病理学检查。采用专业超声软件分析造影图像，评价实验兔睾丸显影的声强度(Power,10E-5AU)，当血池内循环微泡消退后的第一帧CEU图像的POWER值代表微泡在睾丸组织的滞留浓度。使用SPSS13.0软件进行统计学分析，所有数据均以±s表示，组间数据的两两比较采用单因素方

6、差分析，差异性检验水准设为p<0.05。结果第一部分：普通脂质微泡和靶向脂质微泡均为乳白色悬浊液，光镜下可见分布均匀的圆形微泡，粒径分别约1.5~4.0m（MB），1.0~3.0m（MBp），89浓度分别约5.0×10个/mL（MB），1.0×10个/mL（MBp）。荧光显微镜下观察1福建医科大学硕士学位论文普通微泡无荧光，靶向微泡发明显绿色荧光。第二部分：MBp的第一帧CEU图像显示1h组、2h组术侧睾丸可见显著的超声显影，0.5h组、4h组术侧睾丸可见轻度的超声显影，而健侧睾丸和S组双侧睾丸均无明显的超声显影；MB的第一帧CEU图像显示IR组术侧睾

7、丸可见轻度的超声显影，Power值在0.5h组、1h组、2h组、4h组的术侧睾丸，MB均小于MBp（p均<0.05），而MB的Power值在IR组术侧睾丸和健侧睾丸间也有显著性差异(p<0.05)，健侧睾丸和S组双侧睾丸MB均无明显的超声显影；MBp的Power值在IR组的术侧睾丸较健侧睾丸显著增强(p<0.05)；MB、MBp在术前各组的Power值无显著性差异(p>0.05)。睾丸病理检查示对照组睾丸生精小管排列细胞形态正常，排列整齐，间质无充血、水肿，IR组睾丸睾丸生精小管呈不同程度坏死，0.5h组局部间质轻微充血，血管扩张，1h组间质血管进一步扩张

8、，充血淤血加重，白细胞增多、贴壁，2h组间质可见明显充血及白细胞浸