复方丹参注射液抗睾丸缺血再灌注损伤的实验研究论文

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1、复方丹参注射液抗睾丸缺血再灌注损伤的实验研究论文【摘要】目的探讨复方丹参注射液抗缺血再灌注损伤作用。方法建立人尸睾丸离体缺血再灌注损伤模型，用复方丹参注射液干预后，观察睾丸形态结构，并以TUNEL技术显示生精细胞凋亡，NADPHd法显示一氧化氮合酶（NOS）活性，硝酸盐还原酶法测定组织匀浆NO含量。结果缺血再灌注使睾丸组织结构破坏，生精细胞凋亡指数增高，NOS活性增强.freelechanismandeffectofpoundsalviamiltiorrhizainjectionagainstischemia-reperfusioninjury(

2、IRI).MethodsTheisolatedhumantestesIRImodeliltiorrhizainjectionentalgroup.Histologicalchangesethod,andconcentrationofnitrousoxide（NO）ethod.ResultsIschemia-reperfusioncoulddestroyhistologicalstructureoftestes;theapoptoticindex,theNOSactivityandtheNOconcentrationiltiorrhizainjec

3、tioncoulddoiltiorrhizainjectioncanpreventthetissuefromIRIbyregalatingtheNolevel.Keyia-reperfusioninjury；Testes；SalviaMiltiorrhiza；Apoptosis；Nitrousoxide缺血再灌注损伤（ischemiareperfusioninjury，IRI）的机制和防治研究对休克治疗、动脉搭桥、溶栓疗法、心脏外科体外循环、断肢再植和器官移植等临床技术的发展具有重要意义。一氧化氮（nitrousoxide，NO）可能在缺血再灌注

4、所致组织器官结构和功能损伤的过程中起了重要作用［1］。我们建立人尸睾丸离体缺血再灌注损伤模型，用活血化淤中药复方丹参注射液进行干预后，观察睾丸的组织形态、生精细胞凋亡指数、一氧化氮合成酶（nitricoxidesynthetase，NOS）活性及NO含量的影响，了解该药抗缺血再灌注损伤的作用及机制。1材料与仪器26人捐赠尸睾。复方丹参注射液［20g·（10ml）-1，每毫升含相当于原生药丹参SalviamiltorrhizaBge，降香DalbergaodorifereT.chen各1g，批号001208，华西医科大学制药厂提供］；高渗枸橼酸盐嘌

5、呤液(规格为每袋500ml，上海市血液中心)。SDJS-2型精密输液器即蠕动泵（浙江新昌国康仪器厂），小型三用水浴箱（温度范围37～100℃，温波1℃，北京市医疗设备厂）。2方法2.1睾丸离体缺血再灌注损伤模型建立26对睾丸离体后立即置于4℃高渗枸橼酸盐嘌呤液中，剔除鞘膜及多余结缔组织，精索动脉插管固定，4℃高渗枸橼酸盐嘌呤液灌洗至精索内静脉流出液清亮后，备用。其中6对睾丸立即取材作正常对照（12只）。其余20对睾丸中，每两只分别分配到缺血再灌注组（20只）和复方丹参组（20只）。缺血再灌注组用4℃高渗枸橼酸盐嘌呤液低温灌洗至精索内静脉流出液清亮

6、后置于250ml该保存液中4℃冷存12h，再以500ml保存液复温至37℃行循环灌注6h；复方丹参组用含1.5mg·ml-1复方丹参注射液的高渗枸橼酸盐嘌呤液同样操作。2.2组织学及酶组织化学染色常规石蜡切片HE染色，观察睾丸组织学结构。新鲜冰冻切片按NADPHd组织化学法［2］显示一氧化氮合酶（NOS），阳性反应为蓝色沉淀。用NikonEclipseE600光学显微镜观察，并用SpotAdvanced3.0.4.软件采集图象，Image-ProPlus4.1.0.9软件计算灰度值（Integratedopticaldensity，IOD，=Ar

7、ea×AverageDensity）。2.3睾丸组织细胞凋亡检测睾丸组织石蜡切片采用DNA原位缺口末端标记(TUNEL)技术染色［3］（试剂盒购自青岛海泰生物技术有限公司）显示凋亡细胞。阳性细胞的细胞核被染成棕黄色。计数睾丸生精细胞凋亡指数（即每500个细胞核中的阳性细胞核的数目）。2.4睾丸组织匀浆NO含量测定每克睾丸组织加5ml生理盐水，制备20%睾丸组织匀浆，离心取上清，硝酸盐还原酶法［4］测定NO含量。检测试剂盒购自南京建成生物工程公司。2.5统计学处理数据以±s表示，SPSS统计软件包进行t检验。3结果3.1睾丸组织形态观察3.1.1正

8、常对照组曲细精管圆形或椭圆形，各期生精细胞分布正常，间质中血管完整，内皮细胞层呈扁平梭状。3.1.2缺血再灌注组血管内皮细胞肿胀脱落，曲