粉防己碱逆转药物难治性癫痫耐药的研究

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1、复旦大学硕士学位论文粉防己碱逆转药物难治性癫痫耐药的研究ResearchOftetrandrinereversingdrugresistanceinK562/ADMcellsandratsofrefractoryepilepsy院系：复旦大学附属华山医院专业:神经病学导师:洪震姓名：肖霞完成日期：2012年3月目录英文缩写词表˝1中文摘要˝2英文摘要˝6iua˝9第一部分：P-gp对体外培养的耐药细胞内AEDs浓度的影响˝11弓IW˝11材料和方法˝11親˝14體˝18第一部分小结˝19第二部分：粉防己碱对难治性癫痫大

2、鼠行为与P-gp表达的影响˝20第一节粉防己碱对难治性癫痫大鼠行为的影响˝20弓1-˝20材料和方法˝20˝23i寸i仓˝24第二节粉防己碱对难治性癫痫大鼠脑内P-gp表达的影响˝25弓丨-˝25材料和方法˝25会課˝33Hit˝35第二部分小结˝36全文参考文献˝37親˝40附录一˝41时碌二˝42复口.人学硕士学位论文英文缩写词表AEDs˝antiepilepticdrugs˝抗癫痫药MDR˝multidrugresistance˝多药耐药P-gp˝P-glycoprotein˝P_糖蛋白MRPs˝multi-dr

3、ugresistanceassociatedproteins多药耐药相关蛋白BCRP˝breastcancerresistanceprotein˝乳癌抗药蛋白LRP˝lungresistanceprotein˝肺耐药蛋白TTD˝tetrandrine˝粉防己碱PHT˝phenytoin˝苯妥英钠VPA˝valproicacidsodium˝丙戊酸纳CBZ˝carbamazepine˝卡马西平ADM˝Doxorubicin˝阿霉素BBBblood-brainbarrier血脑屏障复旦人学硕士学位论文中文摘要粉防己碱逆转药

4、物难治性癫痫耐药的研究研究背景癫痫是一个的危害人类健康的常见疾病，近年来癫病的发病率有逐年升高趋势。目前口服抗癫痫药物(antiepilepticdrugs,AEDs)仍是治疗癫痫的首选和主要方法。在过去的20年中，尽管不断有新的抗癫痫药投入临床应用，但仍有30%左右的癫痫患者对抗癫痫药不敏感，出现难以被控制的反复癫痫发作，临床上称之为难治性癫痫。难治性癫痫的预后不佳，有较高的致残和致死率，因此研究难治性癫痫对AEDs产生耐药的原因，发现新的治疗措施，具有重要意义。难治性癫痫的一个重要特征是患者对一种AEDs耐药的同时

5、，对其它不同作用机制AEDs也产生耐药性,这种现象被称为多药耐药[1’d(multidrugresistance,MDR)。在多药耐药研究领域，研究最多的是MDR1基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P_gp),它利用分解ATP所释放的能量主动将药物粟出细胞外，导致细胞内药物浓度降低[:M]。研究发现，血脑屏障血管内皮细胞及星形胶质细胞，皮层和海马的神经元、星形胶质细胞、血管内皮细胞上均有丨〕_gp的表达[5』。研究证实，大多数抗癫痫药物如苯妥英钠、丙戊酸纳等都是P-gp的天然底物[7]，P-糖蛋白通过

6、耗能方式主动将抗癫痫药物泵出细胞外，导致癫痫病灶内药物浓度的降低，使抗癫痫药物不能有效发挥作用，这可能是引起难治性癫痫多药耐药的重要机制之一。多项研究发现有效抑制多药转运体，可以逆转多药耐药。在P-糖蛋白拮抗剂中研究最多的是钙通道阻滞剂?，本类药物逆转多药耐药的作用可能是因为它抑制了P-gp的表达或活性从而逆转多药耐药W。但已知的拮抗剂尚具有其它药理活性甚至非特异性的细胞毒性作用而使它开展临床研究受到限制。因此，发现一种选择性高、毒性小的拮抗剂将为治疗癫痫耐药提供有力帮助。粉防己碱（tetrandrine，TTD,Te

7、t)是中药汉防己科植物粉防己中提取的双苄基异喹啉生物碱。研究提示[s，粉防己碱是一种天然非选择性的电压依赖型的钙通道阻滞剂。国内早在80年代已将粉防己碱广泛用于临床治疗高血压、心绞痛等疾病，已取得了较好疗效。多项研究证明，粉防己碱有逆转多药耐药的作用[1<)’"]，但其逆转机制尚不十分清楚，粉防己碱是否能逆转抗癫痫药物的多药耐药，目前的研究报道不多。本课题将从2个方面进行研究：1、观察粉防己碱干预后耐药细胞对于苯妥英钠、丙戊酸纳耐药性的变化。2、观察粉防己碱干预后对难治性癫痫大鼠Racine复n人学硕士学位论文行为分级

8、的变化及脑内MDRlmRNA和P_gp的表达的变化。从体内与体外两个不同的角度研究粉防己碱对于难治性癫痫多药耐药的逆转作用。本研究共分体内和体外两部分：第一部分：1.˝CCK-8法检测耐药细胞K562/ADM及敏感细胞K562对抗癫痫药物（苯妥英钠、丙戊酸纳）的耐药性。2.˝CCK-8法检测粉防己碱干预后耐药细胞K562/ADM及