多瘤病毒jcv的流行状况及其感染与肝病相关性研究

《多瘤病毒jcv的流行状况及其感染与肝病相关性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、温州医学院硕士学位论文多瘤病毒JCV的流行状况及其感染与肝病相关性研究姓名：刘熙君申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：吕建新；王岳2012-05-13温州医学院硕士学位论文多瘤病毒JCV的流行状况及其感染与肝病相关性研究中文摘要目的通过确立JCVDNA与抗JCV抗体检测技术，筛查我国正常人群与肝病人群标本，以了解JCV的流行状况及其感染与肝病的相关性，为JCV的预防与控制提供重要的科学依据。方法1．确立JCVDNA检测技术与JCV全长基因扩增技术用试剂盒提取标本总DNA，通过常规PCR法与半巢氏PCR法检测标本JCVDNA，以琼脂糖凝胶电泳与测序技术比较两种P

2、CR方法的灵敏性与特异性，确立合适的JCVDNA检测技术。使用高保真性的DNA聚合酶，通过常规PCR法，确立JCV全长基因扩增技术。2．制备JCV病毒样颗粒并确立抗JCV抗体检测技术利用基因合成技术合成JCV标准株Mad．1VPl序列，通过基因工程手段，构建PET-JCVPl表达质粒。将PET-JCVPl质粒转化BL21(DE3)与Transetta(DE3)大肠杆菌，IPTG诱导，SDS．PAGE分析检测表达产物，以确立最佳表达宿主菌。通过大量表达JCVP1蛋白，以非连续蔗糖密度梯度超速离心法、非连续CsCI密度梯度超速离心法与氯仿抽提．PEG沉淀法纯化JCV病毒样颗粒

3、，通过SDS．PAGE与透射电子显微镜观察，比较三种纯化方法的纯化效果，确立最佳的JCV病毒样颗粒纯化方法。以原核系统表达且已纯化的JCV病毒样颗粒为抗原，建立检测血清的抗JCV抗体IgG的酶联免疫吸附试验法(ELISA法)。3．用确立的JCVDNA与抗JCV抗体检测技术筛查正常人群与肝病人群标本通过确立的JCVDNA与抗JCV抗体检测技术，筛查正常人群与肝病人群的标本，通过数据分析，统计JCVDNA与抗JCV抗体的流行率、年龄与性别分布特点。通过卡方检验，对肝病人群的JCVDNA与HBVDNA进行统计分析，研究JCV与肝病的相关性。结果1．确立JCVDNA检测技术与JC

4、V全长基因扩增技术使用常规PCR法与半巢氏PCR法扩增标本JCVDNA，比较两种方法的特温州医学院硕士学位论文异性与灵敏性、便捷性等，最终确立常规PCR法为检测JCVDNA的合适方法。通过常规PCR法建立JCV全长基因的扩增技术，并获得一株JCV全长基因。对该株JCV全长基因进行分析，并绘制了JCV全长基因结构图。2．制备JCV病毒样颗粒并确立抗JCV抗体检测技术通过基因工程手段成功构建PET-JCVPl表达质粒。使用BL21(DE3)与Transetta(DE3)大肠杆菌小量表达JCVPl蛋白，结果显示BL21(DE3)不表达VPl蛋白，而Transetta(DE3)的

5、VPl蛋白表达量约占30％菌体总蛋白，因此确立Transetta(DE3)为最佳表达宿主菌。通过大量表达JCVPl蛋白，以非连续蔗糖密度梯度超速离心法、非连续CsCl密度梯度超速离心法与氯仿抽提．PEG沉淀法纯化JCV病毒样颗粒，通过SDS．PAGE与透射电子显微镜观察，比较三种纯化方法的纯化效果，确立氯仿抽提．PEG沉淀为最佳的JCV病毒样颗粒纯化方法。以原核系统表达并且纯化的JCV病毒样颗粒为抗原，建立了检测血清的抗JCV抗体IgG的ELISA法。3．用确立的JCVDNA与抗JCV抗体检测技术筛查正常人群与肝病人群标本用确立的PCR法与的ELISA法筛查了正常人群(2

6、99例)与肝病人群(88例)的尿液、全血JCVDNA及血清抗JCV抗体。结果显示JCV在我国正常人群与肝病人群中普遍流行，其中正常人群JCVDNA阳性率为52．5％、抗JCV抗体阳性率为52．2％，肝病人群JCVDNA阳性率为47．7％、抗JCV抗体阳性率为38．6％。此外，正常人群与肝病人群JCVDNA均随年龄上升而上升。通过对JCVDNA与HBVDNA进行卡方检验，发现无显著差异，说明JCV感染与HBV感染导致的肝病无相关性。通过对随机挑选的12株JCVDNAPCR产物进行基因型分析，发现中国东部地区JCV流行株主要是7型。结论本文确立了JCVDNA与抗JCV抗体检测

7、技术，对我国正常人群与肝病人群JCV流行状况进行了初步研究，结果显示JCV在我国正常人群与肝病人群中普遍流行。同时研究了JCV感染与肝病的相关性，发现JCV感染与肝病无相关性。此外，发现中国东部地区JCV流行株主要是7型。关键词JC多瘤病毒；病毒样颗粒；PCR；ELISA；流行病温州医学院硕士学位论文EpidemiologyofPolyomavirusJCVandtheStudyofAssociationbetweenJCVInfectionandLiverDiseaseABSTRACTObjectiveTodemonstra