plga纳米粒经mdck及caco-2细胞单层吸附、内吞及跨膜转运过程机理研究

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1、博士研究生学位论文论文题目：PLGA纳米粒经MDCK及Caco-2细胞单层吸附、内吞及跨膜转运过程机理研究姓名：何冰学号：10889596院（部）：药学院专业：药剂学导师：张强教授完成时间：二零一二年一月博士研究生学位论文论文题目：PLGA纳米粒经MDCK及Caco-2细胞单层吸附、内吞及跨膜转运过程机理研究姓名：何冰学号：10889596院（部）：药学院专业：药剂学导师：张强教授完成时间：二零一二年一月PhDDissertationThecharacteristicsandmechanismsofadsorption,uptakeandtrans-membraneof

2、thePLGAnanoparticlesinMDCKandCaco-2cellsmonolayerPhDCandidate:BingHeDirectedbyProf.Dr.QiangZhangInstitute:DepartmentofPharmaceuticsSchoolofPharmaceuticalSciencesPekingUniversityJan2012姓名：何冰院系：药学院学号：10889596北京大学医学部学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容

3、外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：年月日学位论文使用授权说明（必须装订在提交学校图书馆的印刷本）本人完全了解北京大学医学部关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容；学校可以为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提

4、供文献传递服务和交换服务。请选择图书馆发布时间:□即时发布□一年发布□二年发布（保密论文在解密后遵守以上规定）论文作者签名：导师签名：日期：年月日北京大学博士学位论文PLGA纳米粒经MDCK及Caco-2细胞单层吸附、内吞及跨膜转运机理研究PLGA纳米粒经MDCK及Caco-2细胞单层吸附、内吞及跨膜转运机理研究摘要纳米粒（nanoparticle）是由天然或合成的高分子材料制成的、粒度在纳米级别（1-1000nm）的固态胶体颗粒体系。在纳米给药系统中，药物高度分散于由高分子材料形成的纳米尺度的球状结构中，依靠药物自身的性质以及载体材料的特性发挥该给药系统特有的优势。特

5、别对于包载难溶性药物的口服纳米给药系统的研究而言，除了有效的保护药物免受胃肠道环境的影响以及提高药物的溶解度以外，纳米给药系统能够跨越口服吸收的粘膜上皮细胞屏障，起到有效提高口服生物利用度的作用。尽管目前纳米技术发展迅速，有效促进了难溶性药物的吸收与转运，但是关于纳米给药系统的具体摄取及跨膜转运作用机理研究较少。本课题以纳米给药系统作为研究对象，建立上皮细胞单层跨膜转运模型，综合分析纳米给药系统在细胞表面的吸附，被细胞内吞及跨膜转运机制。本课题选择MDCK细胞和Caco-2细胞共同作为模型细胞系，并建立跨膜转运模型。MDCK细胞与Caco-2细胞是目前药物及制剂研究中常

6、用模型细胞系。由于二者都具有极性上皮细胞共有的结构特点，同时细胞单层顶膜上均存在多种表面受体蛋白的表达，因此MDCK细胞和Caco-2细胞可以用于有效模拟药物或制剂经过极性上皮细胞屏障的过程以研究其吸收与跨膜转运机制。同时本课题选取目前具有应用广泛性、生物可降解性和生物相容性的PLGA作为载体材料，并将其制备成PLGA纳米粒用于细胞内吞、外排及跨膜转运机理等的研究。本课题通过乳化溶剂挥发法制备了PLGA纳米粒，通过单因素分析确定了用于研究的粒径范围及多分散性。同时本课题以香豆素-6（C6）为荧光标记染料，将其包载于PLGA纳米粒中，制备得到了包载有香豆素-6的PLGA纳

7、米粒(C6-PLGA-NPs)。通过体外泄漏分析以及细胞摄取后荧光强度的比较证明经C6-PLGA-NPs可以通过荧光定位及定量很好的指示纳米粒的内吞、外排与跨膜转运过程。在PLGA纳米粒与MDCK细胞单层表面的吸附研究中，可以发现PLGA纳I北京大学博士学位论文PLGA纳米粒经MDCK及Caco-2细胞单层吸附、内吞及跨膜转运机理研究米粒大量吸附于MDCK细胞表面，同时这种吸附作用具有不均一性。由于纳米粒的吸附作用，细胞的表面形态以及微绒毛的分布发生明显改变。利用荧光漂白恢复技术（FRAP）发现PLGA纳米粒在细胞表面的吸附可以降低细胞质