mir-24对绒毛膜癌jeg-3细胞株的凋亡作用研究

《mir-24对绒毛膜癌jeg-3细胞株的凋亡作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文miR--24对绒毛膜癌JEG--3细胞株的凋亡作用研究姓名：闫金玲申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：庞义存201203中文摘要miR-24对绒毛膜癌JEG-3细胞株的凋亡作用研究摘要绒毛膜癌(choriocarcinomaCC)简称绒癌，是一种继发于正常或异常妊娠之后的滋养细胞肿瘤(gestationaltrophoblastictumor,GTT)。绒癌分为妊娠性绒癌(gestationalchoriocarcinoma，GC)和非妊娠性绒癌(non．gestationalchoriocarcinoma，NGC)两种。在我国及东南亚国

2、家发病率较高，其中50％发生于葡萄胎之后，25％发生于流产后，22．5％发生于足月妊娠之后，2．5％发生于异位妊娠之后。绒癌多数发生于生育期年龄，也有少数发生于绝经后。其恶性程度极高，化疗药物问世前，其死亡率90％以上。目前治疗以化疗或辅以手术治疗为主。正常滋养细胞有较强地分裂增殖能力，滋养细胞发生的肿瘤也具有较强的增殖分裂能力。近年来部分患者在化疗过程中出现耐药，使耐药难治性绒癌预后较差。microRNA(miRNA)是真核生物中一类长度约为22个核苷酸的参与基因转录后水平调控的非编码小分子单链RNA，能通过与靶mRNA特异性的碱基配对引起靶mRNA的降解或抑制其翻译

3、，从而对基因进行转录后的表达调控。在生物的生长发育，细胞增殖、分化和凋亡等诸多生命活动过程中发挥重要作用。近年来，miRNA与肿瘤相关性的研究已成为研究热点。miR-24广泛存在于哺乳动物多种组织，其序列为5-UGGCUCAGUUCAGCAGGAACAG3’，最先由Lagos．Quintanazai⋯于2001年在非脊椎和脊椎动物研究中发现。有研究表明人类miR-24表达为miR．24．1和miR-24．2两种，分别定位于第9号和第19号染色体上。在人类基因组中，miR．24．1与其相邻的miR-23b、miR．27b形成一个基因簇，miR．24．2和miR．27a、m

4、iR．23a组成另外一个基因簇。而miR。24．1和miR-24．2在小鼠基因组中分别定位于第8号和第13号染色体上他3。miRNA功能主要表现调节细胞生长与凋亡。有研究表明miR．24在宫颈癌Hela细胞中具有抑制细胞生长、促进凋亡的作用B¨。转化生长因子一p(transforminggrowthfactor-13，TGF．p)是一组新近发现的具有广泛生物活性的细胞因子超家族。哺乳动物中发现至少有TGF．pl、TGF．p2、TGF．133和TGF．13lp2四个亚型，在人体内主要由TGF中文摘要．pl发挥作用，其信号由Smads家族介导。TGF．13信号通过Smads

5、蛋白从细胞表面传递入细胞核。Smads蛋白家族依据作用不同分为三类：(1)受体调节型Smad(Receptor．regulatedSmads，R．Smad)，包括Smadl、5、8介导骨形成蛋白信号通路和Smad2与Smad3转换TGF．§s和活化素信号；(2)共同介质型Smad(CommonmediatorSmad，Co．Smad)，以Smad4为代表，与R-Smad形成复合体一起，传递TGF．13或活化素骨形成蛋白信号通路信号进入细胞核调节靶基因的转录。(3)抑制型Smad(InhibitorySmad，I．Smad)，负性调节TGF．§信号通路。Sun等弛1研究发

6、现TGF．岱l通过Smad结合位点抑制miR．24的转录。本文旨在探讨miR。24对绒癌JEG．3细胞株的凋亡机制的研究。目的：检测绒毛膜癌细胞JEG．3中miR．24表达以及TGF．0l对miR．24的抑制作用，进一步探讨miR-24在绒癌细胞中发挥的增殖或凋亡作用。方法；用15％(体积分数)胎牛血清的1640培养基，在37℃、5％(体积分数)CO：中培养绒毛膜癌JEG．3细胞。取对数生长期细胞分为两组其中一组加入TGF．131处理，其终浓度为lOOng／ml，一组不予处理，每组又以不同时间点24h、48h分为两个亚组。收集每组细胞，按Redzol--步法总RNA提取

7、试剂盒提取总RNA，逆转录合成cDNA，实时定量PCR测定每组细胞中的miR-24表达量，实验重复3次。MTT比色法测定绒毛膜癌JEG．3细胞增殖活力，实验设4个平行复孔。流式细胞仪检测绒毛膜癌JEG．3细胞凋亡率，实验重复3次。结果：绒毛膜癌JEG．3细胞用含有15％(体积分数)胎牛血清的1640培养基，在37℃、5％(体积分数)CO：培养箱中培养。其生长状态良好，细胞膜完整，细胞核界限清晰，椭圆形或圆形，染色质均匀。用终浓度为100ng／ml的TGF．Bl处理对数生长期绒毛膜癌JEG．3细胞，分别作用24h、48h后提取RNA，实时定