microrna-34a对巨噬细胞炎症应答的抑制作用及其机制研究

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1、复旦大學硕士学位论文microRNA-34a对巨噬细胞炎症应答的抑制作用及其机制研究院系（所）：上海医学院专业:免疫学姓名：姜佩导师：储以微教授指导小组成员：熊术道副研究员高海峰讲师郑秀娟主管技师零一二年四月国家自然科学基金项目：81072408国家重大科学研究计划：2011CB910404复旦大学研究生创新基金资助项目：EYF101107目录2中文摘要3英文摘要6mslo第一部分miR-34a抑制巨噬细胞炎症应答材料方法13会吉^20ife26第二部分miR-34a通过靶向作用Notchl抑制巨

2、噬细胞炎症应答材料方法28g-?38Hit44第三部分miR-34a抑制巨噬细胞炎症应答过程中NF-kB通路的活化材料方法47^53id56全文小结58##3t?60ItM65itilt67综^69复R人学上海眹卞院硕I:卞位论文缩略词表缩写英文名称中文名称cDNAComplementaryDNA互补脱氧核糖核酸2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine4',6-联脒-2-苯基吲哚二DAPI土卜dihydrochlorideim.Hx.nxLDEPCDiethy

3、lPyrocarbonate二乙基焦磷酰胺DMEMDulbecco'sModifiedEagleMedium达尔伯克氏培养基DMSODimethylSulfoxide二甲基亚砜ECLEnhancedchemiluminescence加强型化学发光ELISAEnzymelinkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附试验Glyceraldehyde-3-phosphateGAPDH甘油醛-3-磷酸脱氢酶dehydrogenaseILInterleukin白（细胞）介素LPSLipopol

4、ysaccharide脂多糖miRNAmicroRNA微小核糖核酸miR-34amicroRNA-34a微小RNA-34aNF-KBNuclearfactor-KB核因子-kBPBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链式反应RISCRNA-inducedsilencingcomplexRNA诱导的沉默复合体RTReversetranscription逆转录SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基磺酸钠S

5、iRNASmallinterferingRNA小干扰核糖核酸含Tween-20的Tris盐缓TBSTTris-BufferedSalineTween-20冲液TNFTumornecrosisfactor肿瘤坏死因子UTRUntranslatedregion非编码区2复口.人学上海M/7:院硕十学位论文microRNA-34a对巨噬细胞炎症应答的抑制作用及其机制研究中文摘要microRNA-34a对巨噬细胞炎症应答的抑制作用及其机制研究中文摘要关键词：microRNA，miR-34a,炎症反应，巨卩

6、楚细胞，脂多糖，Notchl,核转录因子KB中图分类号：R3炎症反应是机体免疫系统针对外界刺激如感染和组织损伤而产生的一种复杂的生理性反应，由趋化因子、细胞因子、脂类炎症介质等参与。巨噬细胞是炎症反应的主要效应细胞，激活的巨噬细胞在炎症开始后迅速抵达炎症部位，参与吞噬病原体和分泌各种参与炎症反应的介质和细胞因子。炎症反应中所产生的大量炎症介质在有效清除病原体的同时，也可造成正常细胞和组织的病理性损伤。因此，对炎症反应这把机体防御双刃剑的有效调控就显得尤为重要。MicroRNAs(miRNAs)是一

7、类非蛋白编码的小RNA，长度为18-25nt。它通过结合IE基因mRNA的3'UTR(untranslatedregion)而抑制基因的表达，表现为一种转录后调控基因表达的全新机制，在发育、免疫应答、炎症反应及肿瘤发生发展等生理与病理过程中均发挥重要调控作用。迄今为止，已有一些mmNAs被证实参与炎症反应的调控。然而，我们知道，miRNAs对生物过程的调控通常是以多miRNAs与多靶基因相互协同交错的网络形式完成。因此，对于众多其他miRNAs是否参与炎症反应的调控及其如何参与这一过程等问题，仍有

8、待广泛研究加以揭晓。miR-34a是功能强大的抑癌样miRNAs之一，因其显著的肿瘤抑制功能而在多种类型肿瘤中被广泛研究。由于miRNAs的表达及功能异常是联系炎症与肿瘤的众多纽带之一?，miR-34a与肿瘤的密切相关性是否预示着其在炎症反应中也发挥着重要调控作用？然而，迄今为止，有关miR-34a在炎症反应中的调控作用仍未见报道。基于以上研究背景，我们以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激巨丨菌细胞述立炎症模型，酋次研究了miR-34a在炎症反应中的作用,旨