cic-2对慢性颞叶癫痫大鼠海马ca1区α5亚基-gabaar介导紧张性抑制的影响

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1、复旦大学博士学位论文CIC--2对慢性颞叶癫痫大鼠海马CA1区α5亚基--GABAAR介导紧张性抑制的影响姓名：葛宇星申请学位级别：博士专业：神经病学指导教师：汪昕2012-03复旦大学博士研究生毕业论文中文摘要CIC．2对慢性颞叶癫痫大鼠海马CAl区值5亚基．-GABAAR介导紧张性抑制的影响中文摘要颞叶癫痫是一组以反复癫痫发作、学习记忆功能减退为主要临床表现的疾病。以往的研究表明，它与海马局部神经元退行性变、胶质增生、异常环路重构以及脑内兴奋一抑制作用失衡有关。在成年动物中枢神经系统中，GABA作为主要的抑制性神

2、经递质，通过GABA．R起作用。其中，GABAAR主要通过介导Cl。内流引起细胞超极化而发挥抑制作用。根据GABAAR的分布和激活后的电生理特性，可以将GABAAR粗略地分成两大类：synapticGABAAR和extrasynapticGABAAR，前者介导GABAergic的时相性抑制(phasicinhibition)，后者介导GABAergic的紧张性抑制(tonicinhibition)。近年来，extrasynapticGABAAR介导的紧张性抑制吸引了越来越多学者的关注。但无论是时相性还是紧张性抑制，均

3、依赖于神经元内低氯状态。有研究表明，GABAAR激活后，氯离子内流和碳酸氢根离子外流是相藕联的，由于碳酸酐酶的作用可维持细胞内碳酸氢根离子的高浓度，所以，碳酸氢根离子可持续的顺浓度梯度大量外流，同时，氯离子亦大量内流，从而介导突触后抑制作用。如果氯离子在短时间内不能有效排出细胞外，以保持细胞内的低氯环境，反复激活GABAAR会引起细胞内氯离子超载，后者可增加氯离子内流的阻抗，使突触后抑制作用明显减弱。因此，向胞外转运氯离子的能力对于维持神经元正常的GABAergic抑制作用显得尤为重要，氯离子稳态的打破有可能参与了异

4、常放电的形成，而并非仅仅是异常放电的结果。细胞内外氯离子的浓度梯度主要是由一组阳离子．氯离子同向转运体和氯通道共同调节。C1C．2是电压门控性氯通道中的一种，参与调节细胞内外氯离子浓度、维持细胞膜电位等。已有研究表明，在癫痫模型中，作为成熟神经元上主要的氯离子外向转运体KCC2明显下调。考虑到CIC．2本身的特性，即在膜内电位低于膜平衡电位时被激活，产生内向整流，电导大，且该通道的失活无明显时间依赖性。那么，在癫痫病理状态下，C1C．2有何改变?Rinke用C1C一2基因敲除小鼠证实，在细胞内高氯的状态下，C1C．2

5、有一定的外向转运氯离子的作用，且承担了相当一部分的背景电导以维持膜电位的稳定，但野生型和基因敲除小鼠的mIPSP、sIPSP和PPR均没有显著性差异，说明C1C．2与GABAAR介导的时相性抑制无关。有研究表明，在成年动物海马CA区，复旦大学博士研究生毕业论文中文摘要GABAergic的紧张性抑制主要是由Q5亚基．GABAAR介导。我们要研究的问题是：ClC．2是否与值5亚基．GABAAR介导紧张性抑制有关?即药物阻断Ⅱ5亚基．GABAAR是否引起ClC．2电流的改变?在癫痫病理状态下，ClC．2电流有何改变?0【5

6、亚基．GABAAR介导的紧张性抑制本身有何改变?这种改变对大鼠慢性期SRS发作有何影响?在体阻断证5亚基-GABAAR能否改善大鼠海马的突触可塑性?第一部分匹罗卡品致病大鼠的行为学特征及海马神经元损伤的表现目的：观察匹罗卡品致痫大鼠的行为学特征及海马CAl区神经元损伤的情况。方法；雄性SD大鼠(180．2009)随机分成对照组、致痫组，为了解大鼠致痫后不同时期的行为学特征、海马神经元的损伤情况以及目的蛋白表达的变化，根据致痫后自然病程的长短，将致痫组分为：急性期组(致痫后24小时)、潜伏期组(致痫后5天)、慢性期组(

7、出现SRS后14天)和晚期组(出现SRS后30天)。致痫组给予匹罗卡品(340mg／kg，i．p．)致痫，致痫前30min给予阿托品(5mg／kg，i．p．)减轻外周胆碱能作用。如果首剂匹罗卡品注射-d,时后仍没有点燃，可以追加一次匹罗卡品(170mg／kg，i．p．)。点燃的行为学表现以出现节律性点头、咀嚼、湿狗样抖动、继而直立、跌倒为判断标准。化学点燃后90min给予地西泮(10mg／kg，i．p．)终止发作，之后使用数字摄像机持续视频监测大鼠的行为学表现，并记录潜伏期、首次SRS发作的时间、慢性期SRS的发作频

8、率及发作持续时间等。采用视频采集卡进行后期资料的采集和分析。对照组除了以生理盐水代替匹罗卡品外，其他处理与致痫组完全一致。应用免疫荧光标记NeuN来观察对照组和致痫后各组大鼠海马CAl区神经元的形态及数量，评估CAl区神经元的存活情况。免疫荧光染色结果的定量分析，采用连续冠状位冰冻切片(201ma)，每隔3张脑片取1张，每只大鼠选取5张脑片进行