几种水质指示微生物检测方法的研究进展

《几种水质指示微生物检测方法的研究进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、几种水质指示微生物检测方法的研究进展新疆阿图什市疾病预防控制中心845350摘要：检测水中指示微生物是估计污染状况的重要途径，木文就大肠杆菌。产气荚膜梭菌及脊髓灰质炎病毒的检测方法、进展及前景做了综述关键词：大肠杆菌；产气荚膜梭菌；脊髓灰质炎病毒；检测方法水中致病微牛物种类繁多，现在还不能用单一方法来分离和鉴定水中微牛物，也没有课从饮用水中定量分离出数量很少病原体的有效方法，所以，通常以水中指示微牛物代替致病微牛物进行检测，从而估计污染状况，已提出的指示微牛物包括大肠杆菌，细菌总数，产气荚膜梭菌、大肠杆菌噬菌体及枯草芽泡黑色变种、脊髓灰质炎病毒，其中大肠杆菌一直被作为常规水质细菌学指标；产气荚

2、膜梭菌为厌氧菌，用做指示菌有其独特之处；脊髓灰质炎病毒近年来微牛物被提出有可能成为水病毒的较好指标，故木文选择这三种指示微牛物，对他们的检测方法及其优缺点和进展进行综述。1.大肠菌群大肠菌群作为粪便污染及评价消毒效果的指标己有80余年的历史，目前各国水质卫牛标准将其作为水细菌群的常规检测方法比较普及1.1经典方法1.1.1多管发酵法将适量水样接种于一系列有培养基的试管中进行培养，根据产牛阳性反应的试管数量来估计原始水样中菌的最大可能数（MPN）,其中培养基主要有：矿质改良的谷氨酸盐培养基（MMGM）,麦康凯氏胆•盐肉汤。此法可用于各种类型的水，特别是浊度较高的水，而但所需设备价廉、简便，阳性结

3、果易于辨认；乂受固有误差的限制，在确定阳性结果之前还要做确证试验,故费事（约72h）、费力。1.1.2滤膜过滤法100ml水样通过滤膜过滤后，将滤膜置于选择性培养基表面进行培养，然后计数并鉴定滤膜上的菌落。其中选择性培养基主要有:伊红美蓝琼脂、品红亚硫酸钠琼脂，此法能迅速的获得结果（48h）手续简便，尤其在检查大量水样时可现场过滤，将滤膜放于培养基上带冋实验室，不仅可避免携带水样等繁琐手续，而且缩短吋间；但此法不能分辨发酵乳糖的细菌是否产气，其次如果非大肠菌群生长过多，则会干扰犬肠菌群生长，此外它不适用于混浊度高的水。2•产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌属于梭状芽孑包杆菌属，为革兰氏阳性短粗杆菌，专性

4、厌氧,有荚膜，芽砲椭圆形，一般位于次极端，但很少见，由于产气荚膜梭菌的特性,作为水质污染微生物，但产气荚膜梭菌的检测方法得以解决。2.1经典方法2.1.1MPN法将适量水样接种于一系列有培养基（增菌性梭状芽泡杆菌培养基）的试管中进行厌氧培养48h,根据产生阳性反应（培养管变黑）的试管数量来估算原始水样中的MPN此法可用于各种类型的水；但仅能提供水样中含菌量的估计值，易受固有误差限制，在确定阳性结果前还需做确证实验故费（约72h）费力。2.1.2倾注法将0.5ml水样接种于有选择性培养基的培养皿中，干燥倾注上层选择培养基，凝固后进行厌氧培养24h,然后计数并鉴定培养基上生长的菌落，选择性培养基主

5、要有：SFP培养基，TSC培养基等，此法能较迅速地获得结果，较简单，尤其在人量水样检查吋可现场完成，从而避免携带水样等繁琐手续，但不适于浑浊度较高的水。2.2其他方法2.2.1免疫学方法Bartholomew⑻用ELISA方法检测产气荚膜梭菌,以兔抗体产气荚膜梭菌外毒素（CPE）血清与产气荚膜梭菌反应，结果表明该法较敏感（检出5ng/g）特异性强，而且仅需24h；但需要专业人员和特殊设备。Berry⑼提出用反相被动乳胶凝集试验（LAT）检测产气荚膜梭菌，试验结果发现LAT与ELIAS敏感性和特异性相似，却省吋。无需特殊设备。但需孵育过夜。以后又有学者［10］报道用竞争性红细胞免疫法（ELIAS

6、）法更敏感，（检岀2ug/L）,且方法为用免疫学检测环境水中产气荚膜梭菌提供条件。2.2.1分子生物学方法有报道［口］用合成的DNA探针检测肠毒性产气荚膜梭菌；Fach和Guillon［12］fflPCR法扩增产气荚膜梭菌的α■外毒素基因，凝胶电泳进行检测，发现PCR法特异性，敏感（检出250fg/g）快速（约4h）；产气荚膜梭菌外毒素基因已被克隆，核酸测序表达于E.coli中，这分子生物方法为水中产气荚膜梭菌的检测开辟了新途径，使敏感•特异、快速地检测中产气荚膜梭菌为可能。脊髓水质炎病毒呈园颗粒，核心为单分子正链RNA,病壽RNA蛋白衣壳所包围，无囊膜，蛋白衣壳由60非共价键连接

7、的衣壳子粒组成，构成一个方对称的20面体,PV在天然水中存在相对比较普遍［13］抵抗力较其它肠道病毒强。被提岀可能作为水病毒污染的指示微生物，检测水中PV前--般要经过水样的浓缩，浓缩方法常用的有微孔滤膜吸附洗脱法，氢化铝吸附沉淀和聚乙二醇脱水透析法，它的检测方法主要有以下几种。2.1蚀斑试验法繁殖20・40瓶Hep・2或RD细胞，将瓶中的液体吸岀，加浓缩后的病毒悬液于每瓶细胞面上，并使其均匀分布