猪血中四环素类兽药残留液相色谱研究

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1、猪血中四环素类兽药残留液相色谱研究现行的国家标准和农业部行业标准中规定的检验方法是针对动物源性食品的检验，而对于畜血中药物残留的检验国家没有制定出相应的检验方法。由于畜血成份复杂，不能用常规的处理方法提取血中的药物残留。本实验在国家标准检验方法的基础上，对猪血的前处理方法进行了实验研究。1试剂、仪器与实验1.1试剂土霉素标准品纯度290.5%、金霉素标准品纯度297.0%、乙惰I（液相色谱级）、乙惰II（优级纯）、磷酸二氢钠、冰乙酸（分析纯）标准溶液的配制：分别称取各药物标准品，用去离子水稀释，根据药物在仪器上的响应情况，配

2、制不同浓度的混合标准工作液。1.2色谱仪与色谱条件LC-20A高效液相色谱仪：日本岛津，配有紫外检测器；旋转蒸发器，上海申胜；涡旋振荡器，北京紫光；超声波振荡器，天津奥特塞因斯；GPC凝胶净化仪，美国；C18固相萃取柱，美国SUPELC0公司色谱柱：SHIMADZUVPODS150minX4.6mm柱及10mmX4.6mm预柱流动相：乙睛：0.01mol/L磷酸二氢钠=20：80(pH=3.0),流速1.Oml/min紫外检测器波长：X=355nm,柱温箱：设置柱温35°C色谱分析：分别量取10卩1混合标准液及样品净化液注入

3、液相色谱仪中，以相对保留时间定性，以外标法定量。1.3样品制各与提取猪血样品，分别取自于屠宰场和个体养殖户。采用兽用一次性无菌注射器，在猪耳内侧采集静脉血50ml放于100ml具塞比色管中，放置3小时后进行离心处理，2500rpm离心20min,取上层血清备用。取10ml血清置于100ml具塞比色管中，加入4mll0%冰乙酸水溶液和30ml乙膳II,涡旋振荡lOmin,超声提取30min,静止8小时,经离心机3000rpm离心lOmin,取上层清液。在剩余物中再加入20ml乙月青II,涡旋振荡5min,超声提取30min,再

4、用离心机离心，合并上层清液。将上清液于旋转蒸发器中浓缩至约1ml,将浓缩液倒入净化柱中，再用lml乙月青I冲洗蒸镭瓶，冲洗液一并倒入净化柱中。1.4样品净化C18固相萃取柱预先用5ml甲醇活化，再用3ml乙月青I清洗后备用。将样品浓缩液倒入已活化的C18固相萃取柱，控制固相萃取时间8min,再用少量乙鷹I冲洗C18固相萃取柱，收集净化液于lml容量中，用乙睛I定容，留待LC分析。2乙瞇试验结果2.1方法的线性实验在1.2的色谱条件下，取两种药物配制9个梯度浓度（土霉素标准液浓度0.0、2.5、5.0、10.0,15.0、20

5、.0、30.0、40.0、80.Omg/L；金霉素标准液浓度0.0、5.0、10.0、20.0、20.0、40.0、60.0、80.0、160.Omg/L）的混合标准液进样,进样量10U1,得到色谱图，见图1,记录峰面积。以各组分的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制线性曲线并进行回归计算，得到线性方程及相关系数，同时配制低浓度的两种药物混合标准液，计算两种药物的最低检出限，见表lo结果表明，两种药物在以上的浓度范围内均呈现良好的线性。2.2加标回收率和精密度在线性范围内做样品加标回收实验和方法的重现性实验。将土霉素和金霉素以高

6、、中、低三个浓度添加于不含药物残留的畜血血清中，进行6次回收实验，其回收率和相对标准偏差（RSD）见表2。从方法的线性方程、加标回收率和相对标准偏差来看，该方法能满足畜血中药物残留分析的要求。用乙睛加冰乙酸提取和C18固相萃取柱萃取对于畜血中药物残留具有很好的前处理功效，能有效地提取畜血中的药物残留，前处理速度快、操作简便，与色谱测定相结合，是一种测定畜血中药物残留的很好的实验方法。