2017-2018学年高中生物第三章酶的制备及活力测第一节酶的制备及活力测定学案中图版选修1

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1、N谍Si呈目际•第一节酶的制备及活力测定KECHENGMUBIAOYINHANG^1•研究酶的存在和简单制作方法。2.尝试利用酶活力测定的一般原理和方法。JICHUZHISHISHULI一、酶的粗提取1.提取方法酶是在生物体活细胞中合成的。多数酶在细胞内直接参与生物化学反应,少数的酶要分泌到细胞外发挥作用。提収存在于细胞内的酶，需要破碎主物组织细胞，可用破碎仪、研磨器或匀浆器等机械将组织细胞鯉，使酶从活细胞中释放出来，进入细胞外的溶液中，经过滤、离心制备成粗酶液。唾液淀粉酶、胰蛋白酶等分泌到细胞外的酶，可以直接从动物分泌物或细胞外的组织间隙中提取。2.

2、提収过程屮影响酶活力的因素在酶的提取过程中，湿度、酸碱性等多种坏境条件都对能影响酶的空间结构,导致酶变性，直至丧失活力。二、酶的活力1.酶的活力检测指标酶的活力通常以单位时间内底物的消耗量或者在单位时间内产物的生成量来表示。例如，通过测定单位时间内麦翹的生成量来检测淀粉酶的活力。由于麦芽糖与3,5-二硝基水杨酸试剂反应，能生成黄褐色产物,因此，利用分光光度法进行比色,可以测出麦芽糖的生成量。另外，还可以通过测定单位时问内軽的消耗量来检测淀粉酶的活力。2.分光光度法分光光度法是血过直接测定溶质对光的吸收能力来确定溶液浓度的方法。在定量分析时，首先配制一系

3、列浓度梯度的标准溶液,在分光光度计上，选取特定的波长,测出它们的吸光值。以各种标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。比色测定待测样品时，操作条件应与绘制标准曲线时相同。测出吸光值后，从标准曲线上读出它的浓度，以计算出待测物质的含量。三、植物淀粉酶的制备及活力测定1.材料的选择萌发的水稻种子是提取淀粉酶的好材料。2.操作过程（1）提取酶液。（2）滴加酶液。（3）恒温处理。（4）钝化处理。（5）测定吸光值。（6）绘制标准曲线。3.结果分析淀粉酶活力_（A-A'）X样品稀释总体积（mg•g~'・min"1）—样品鲜重XVXt式中：A为淀

4、粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量（在标准曲线上查得，mg）；Az为淀粉酶的对照管中的麦芽糖量（吨）；V为比色时所用样品液体积5L）；t为酶促反应时间（min）。四、过氧化氢酶粗酶液的制备及活力测定1.制备过氧化氢酶粗酶液以新鲜动物肝脏、马铃薯块茎或萝卜块根为材料，经过切碎、研磨、离心，取上清液即可得到过氧化氢酶粗酶液。1.分光光度法测定过氧化氢酶的活力在过氧化蛍酶存在吋，过氧化氢将愈创木酚氧化生成茶褐色产物,这种产物在波长也nm处有最大吸收峰。待酶反应终止后，过滤，取滤液适当稀释，在波长470nm处测吸光值,计算出过氧化氢酶的活力。2.高镭酸钾滴定法测定过氧

5、化氢酶的活力过氧化蛍酶可以催化H2O2分解为生和氫。如杲在反应系统中加入适当过量的过氧化盘溶液，经酶促反应后，在酸性条件下，用标准高猛酸钾溶液滴定多余的HA,反应如下：5H2O2+2KMn0i+4H2SO4—502+2KHSO4+8H2O+2MnSO4根据消耗的HQ的量计算出过氧化氢酶的活力。酶活力用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示。癸破ZHONGDIANNANDIANTUPO1.酶活力所谓酶活力，指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的测定实质是测定一个被酶所催化的化学反应的速度。酶反应的速度可以用单位时间内反应底物的减少或产物的增加来表示

6、,酶反应的速度愈快所表示的酶活力愈高。测定酶活力，可用物理法、化学法或酶分析法等方法。常用的方法有：第一，在适当的条件下，把酶和底物混合，测定生成一定量产物所需的时间，此即终点法。第二，将酶和底物混合后隔一定时间，间断地或连续地测定反应的连续变化，如吸收度的增加或减少。第三,将酶与底物混合后，让其反应一定时间，然后停止反应，定量测定底物减少或产物生成的量。酶的活性单位（国际单位TU）：指在25°C下，以最适的底物浓度、最适的缓冲液离子强度以及最适的pH等条件下，1分钟能转化1umol底物的酶量定为1个活性单位。2.测定酶活力时的注意事项（1）酶促反应过

7、程中，只有最初一段时I'可内反应速度与酶浓度成正比，随看反应时间的延长，反应速度即逐渐降低。（2）要规定一定的反应条件，如时间、温度、pll等，并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定，如温度不得超过规定温度的±1°C,pH应恒定。（3）配制的底物浓度应准确且足够大，底物液屮应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中，以防止底物被分解。（4）标本要新鲜，由于绝大多数酶可因久置而活力降低，标本如无法及时测定，应保存于冰箱中。用血浆时，应考虑到抗凝剂对酶反应的影响。有些酶在血细胞、血小板中的浓度比血清高，为此在采血、分离血清时，应注意防止溶血和白细胞的破裂。

8、（5）在测定过程中，所用仪器应绝对清洁，不应含有酶的抑制物，如酸、碱、蛋白沉题型一酶的特性【例