2017-2018学年高中生物第一章微生物培养技术第三节测定微生物的数量学案中图版选修1

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1、-谍帀呈目际•第三节测定微生物的数量KECHENGMUBIAOYINHANG^襦理常握测定特定样品中的微生物数量的方法。星础知识•JICHUZH!SHISHULI一、测定微生物数量的方法测定微生物数量的方法可分为两类：JB接计数法和间接计数法。1.直接计数法（1）方法：常用的是显微镜直接计数法,先将待测样品制成悬液,然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数,计算出单位体积内的微生物总数。（2）优点：所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征。（3）缺点：难以计数微小的细菌。（4）适用范围：一般适用于纯培养悬浮液中各

2、种里细胞菌体的计数。2.间接计数法（1）方法：常用的是稀释平板计数法。先将待测样品配制成均匀的系列稀释液,尽量使样品中的微生物细胞分散开°再取一定稀释度、一沱量的稀释液接种到平板小，使其均匀分布于平板中的培养基内；或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至45°C左右的琼脂培养基混合，倾入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。经过培养后，就由里个微生物生长繁殖形成菌落，这样的一个菌落就代表着二个微生物个体。统计培养基中出现的菌蓬数，即可推算出检测样品中的活菌数。（2）优点：在样品中含菌数较少的情形下,也可以完成计数。二、实例1.稀释平板法计数土壤中好气性细菌土

3、壤中数虽众多的微生物对提高土壤起力有重要作用，因此，测定土壤中的含菌量可以作为判定土壤肥力的一个重要指标。计数时要选取具有合适菌落数的稀释倍数并计数。选择的原则是：（1）细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30〜300个菌落为宜。霉菌以每个培养皿内有10〜100个菌落为宜。（2）同一稀释倍数各个重复的菌落数相差不要A悬殊。统汁出的菌落数按下列公式汁算，得出每克样品菌数。每克土壤样品菌数VIIII韓珞X稀释倍数2•检测天然水源中细菌总数和大肠菌群数细菌总数通常是指1g或1niL检测样品中所含细菌菌落的总数,单位用cfu/g（mL）表示。大肠菌群数通

4、常是指每100g或100H1L检测样品中所含大肠菌群的实际数值,以（MPN）表示。大肠菌群是指在卫。C条件下，24h内能发酵乳糖,产酸产气的一类需氧或兼性厌氧型革兰氏阴性无芽抱杆菌的总称。大肠菌群数的检测，常用多管发酵法,使用乳糖胆盐蛋白腺培养基、伊红美蓝琼脂培养基（EMB培养基）和乳糖发酵管。3.土壤中分解尿素细菌的计数有些细菌含有尿素分解酶,能将尿素琼脂培养基川的尿素分解生成氨，氨溶于水变成氢氧化鞍，导致培养基变成喊性，使酚红指示剂呈现红色。思考：土壤有“微生物的天然培养基”之称，为什么？提示：由于土壤具备了各种微生物生长所需的营养、水分、空

5、气、酸碱度、渗透压和温度等条件，是微生物生活的良好环境。对微生物来说，是微生物的“大本营”；对人类来说,突破ZHONGDIANNANDIANTUPO^是最丰富的“菌种资源库”。1.显微镜直接计数法与稀释涂布平板法的比较显微镜直接计数法是利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法是将经过适当稀释的菌悬液放在血球计数板的载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。rtl于计数室的容积是一定的（0.linn?）,所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌和死菌的总和，故又

6、称为总菌计数法。此法的优点是直观、快速，但需要与血球计数板配套使用，且计数随机性大，所以对菌体数量不能做出较为宏观、全面的反应。平板菌落计数法通常做梯度稀释，所以计数的线性范围大。由于是菌悬液涂布，所以比较均匀，能较好地反映菌落的疏密程度，重复性、平行性好，是经典的计数方法。但需要平板上长11!菌落一段吋间后才能计数，因此速度慢是最大的缺点。2.在土壤屮采集菌样的方法与要点由于在土壤中儿乎可找到任何微生物，所以土壤往往是首选的采集目标。土壤采样必须考虑以下儿个问题：（1）土壤中有机物的含量：有机物含量高，土质较肥，一般在其屮微生物数量也较多,反之

7、微生物数量也就较少。（2）采土的深度：土壤的深度不同，其通气、养分和水分的分布情况也不同。表层的土壤直接受日光曝晒，故佼干燥，微生物也不易大量繁殖。在离地面5〜20cm处的土壤中,微生物含量最高。（3）植被情况：植被的种类与微生物的分布有着密切的关系。例如，在冬天灌水的水稻E土壤中，真菌分布得较多。（4）采土的季节：以春秋两季为宜。这时土壤中的养分、水分和温度都较适宜，微生物的数塑也最多。采土时尤其应注意土壤的含水量，水分过多会造成厌氧环境，不利于放线菌的生长繁殖。真菌虽需要较高的相对湿度，但基质中的水分却不宜过多。因此要避免在雨季采集土样。此外

8、，土壤的pH也应适当注意，细菌和放线菌在屮性或微碱性土壤屮居多，而真菌则在偏酸性的土壤中较丰富。（5）采土方法：选择好适当地点后，用小铲