靓精对几种动物病原菌的体外抑菌作用

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1、靓精啜对几种动物病原菌的体外抑菌作用一、目的意义木试验通过靓精1M的体外杀菌试验，证实其对临床上常见细菌的杀灭效果，为其临床应用提供参考。二、试验时间与地点2012年5・6月，江苏省南京市南京农业大学动物医学院药理与毒理实验室。三、试验人员试验负责人：季辉，南京农业大学动物医学院基础兽医系四、试验菌种：品种：大肠杆菌（EC010、235）、沙门氏菌（LH01、H9812）、巴氏杆菌、里氏杆菌（RAI、RA2）、猪链球菌LX13、猪胸膜肺炎放线杆菌（S259）。来源：南京农业大学预防兽医学微生物实验室惠赠，保存于药理实验室。五、试验药物：兽药名称：靓精皿（5%）生产厂家：

2、成都美强兽医技术服务有限公司提供生产日期：2012-03-11生产批号:120304六、试验方案6.1细菌繁荊体悬液制备：1）以无菌操作方式开启菌种管，用毛细吸管加入适量营养肉汤培养基，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。取含5.0mL〜lO.OmL营养肉汤培养基试管，滴入少许菌种悬液，置37°C培养18h〜24h。用接种环取第1代培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，置37°C培养18h〜24h。挑取上述第2代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，置37°C培养18h〜24h,即为第3代培养物。2）収第3〜6代的营养琼脂培养基培养18h〜24h的新鲜斜面培养物，用5

3、.0mL吸管吸取3.0mL〜5.0mL稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。随后，用5.0mL吸管将洗液移至另一无菌试管中，用电动混匀器混合20s,以使细菌悬浮均匀。3）初步制成的菌悬液，先用细菌浓度比浊测定法粗测其含菌浓度，然后以稀释液稀释至所需浓度。4）细菌繁殖体悬液保存在4°C冰箱内备用。5）怀疑有污染时，应以菌落形态、革兰染色与生化试验等法进行•鉴定。6.2活菌培养计数方法：采用琼脂倾注平板法。以菌落数在30〜300的平板为准，对估计菌量极少的样本（如消毒处理后样本），在培养计数时可不作稀释，即使平板菌落数未达30时，亦可用其计算最终结果。将求得的平均菌落值

4、，再乘以稀释倍数，即得每毫升原样液中的菌量。菌量单位为cfu/mLo6.3试验分组表1试验分组与处理方法组另IJ重复（次）处理方法高浓度组（1/50）3100

5、iL+到总体积4mL无菌水中中浓度组（1/1（X））350pL+至lj总体积4mL无菌水屮低浓度组（1/200）325yL+到总体积4mL无菌水中阳性対照组3无菌标准硬水4mL阴性对照组3稀释液+培养某菌液对照3100PL菌液倍比稀释到疗、1（）6两个稀释度备注：如出现部分菌株在1/200稀释斤作用1〜5min杀灭率出现100%,则继续做1/400稀释度的杀灭率试验。6.4结果统计：平均杀菌率（P）V（Noi-N

6、ti）P=xlOO%YNoi6.5数据分析试验数据用MicrosoftExcel进行处理，以平均杀菌率表示，并标注杀菌率范围。七、结果与分析7.1靓精丁“对人肠杆菌的杀灭效果表2靓制严对人肠杆菌01（）作用不同时间的杀灭效果菌种靓精咄稀释度作川不同时间（min）后的平均杀灭率及范围（％）平均对照菌数cfu/mLlmin5minlOmin100%100%100%1/50(10()〜100)(10()〜100)(10()〜100)98.12%99.08%100%人肠杆菌0101/1001.30X107(96.41〜98.89)(97.48〜99.78)(100〜100)85

7、.98%90.50%100%1/200(75.82〜89.18)(87.72〜92.54)(100〜100)阴性对照：稀释液、培养基均无菌生长。结论：靓精叫/50稀释，作用lmin对人肠杆菌010的杀菌效果为100%,1/100稀释时作用lOmin时对010的杀菌效果达到100%。表3靓楮用对大肠杆菌235作用不同时间的杀灭效果菌种靓精理稀释度作用不同时间（min）后的平均杀灭率及范围（％）平均对照菌数cfu/mLlmin5minlOmin100%100%100%1/50(100〜100)(100〜100)(100〜100)100%100%100%1/100(100〜1

8、00)(100〜100)(100〜100)大肠杆菌2351/20098.56%100%100%5.13X106(97.03〜99.14)(100-100)(100〜100)89.02%91.71%95.76%1/400(88.26〜90.35)(91.07〜93.14)(93.18〜97.26)阴性对照：稀释液、培养基均无菌生长。结论：靓精皿1/50、1/100稀释,作用lmin对大肠杆菌235的杀菌效果为100%。1/200稀释作用5min对大肠235的杀灭效果为100%。7.2靓精邛对沙门氏菌的杀灭效果表4为不同浓度靓精tm对沙门氏菌