妇科实寒症和虚寒症代谢组学及证候的形成过程中相关网络调控比较的研究论文

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1、中文摘要妇科实寒证与虚寒证代谢组学及证候形成过程中相关网络调控的比较研究摘要目的：寒证为八纲之一，妇科寒证是临床较为多见的病证之一。妇科寒证有实寒证、虚寒证之分，两者的病机、临床表现和治法用药各不相同。临床鉴别实寒证、虚寒证主要以患者主诉为依据，但常有主观因素。对于两证客观指标的变化，学者们应用病理学、分子生物学等方法进行了大量研究，发现实寒证、虚寒证机体神经内分泌、免疫、细胞因子及体内微量元素含量都较正常有不同程度的变化，但尚缺乏两证的对照研究，且未发现可以区分两者的特异性指标。因此，实寒证、虚寒证的生物学本质之间究竟有无差异及其差异点至今仍未明确。“证"是中医辨证论治的

2、根本，也是中医精华所在和发展中医学的关键。“证’’本质一直是中医基础理论研究的核心内容，阐明中医“证"本质是实现中医现代化必须解决的关键问题。本课题从临床研究和动物实验两个层次，以代谢组学为研究手段，比较实寒证、虚寒证痛经患者尿液代谢产物的异同，寻找两证的差异性物质；创建妇科虚寒证大鼠模型；以妇科实寒证、虚寒证模型大鼠为研究对象，从机体神经内分泌免疫系统及能量代谢角度，进一步阐释临床代谢组学结果，探究妇科实寒证、虚寒证发生过程中机体多个系统的变化规律，比较不同证在发生过程中机体调控机制的异同，明确两者的生物学本质特点，促进中医诊断学和中医妇科学的发展。方法：1以实寒证、虚寒

3、证痛经患者及正常对照组为研究对象，选择N一甲基．N-三甲基一硅基三氟乙酰胺(MS吓A)作为衍生化试剂对各组月经周期第2d(MC2)尿液代谢产物进行气相色谱．飞行时间质谱(GC．TOFMS)检测，得出各组总离子流色谱图(TIC)，结合非监督的主成分分析(PCA)进行多维统计分析，寻找实寒组、虚寒组及正常组的差异代谢产物。放射免疫分析法(RjA)检测上述三组MC2血清生殖内分泌激素，包括卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)及睾酮(T)；化学法检测三组MC2、MC7空腹血糖(FPG)、血脂及尿糖。中文摘要2模拟妇科虚寒证发生的病因，依据“寒邪伤阳"

4、的中医理论，采用延长冰箱冷冻加冰水浸泡时间方法创建妇科虚寒证大鼠模型。将SD雌性大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组和治疗组，每组各10只。模型组、治疗组置于O℃～1℃冰水中并放入4。C冰箱中，2次／d，20min／次，共30d。正常组常规饲养，治疗组造模同时灌胃金匮温经汤，其余两组灌胃等体积蒸馏水。造模结束后，择动情间期处死大鼠，观察各组大鼠一般情况、肛温、体重及子宫、卵巢形态；检测血清FSH、LH、E2、P、T，血浆皮质酮(CORT)，血清白介素2(几．2)，血浆cA_]V[P、eGMP、cAMP／cGMP及胸腺、脾脏、子宫、卵巢指数。3以妇科实寒证、虚寒证模型大鼠为研

5、究对象，比较两证形成过程中神经．内分泌．免疫(NEI)调控的异同。采用冰水浸泡方法创建实寒证大鼠模型；采用延长冰箱冷冻加冰水浸泡时间方法创建虚寒证大鼠模型；分别在造模不同时间点(3d为一个时间单位)检测下丘脑．垂体．肾上腺皮质(}玎)A)轴、下丘脑．垂体．甲状腺(唧T)轴、下丘脑．垂体．卵巢轴(邯OA)血液相关激素及免疫系统相关指标的变化。血液T淋巴细胞亚群采用流式细胞仪检测；血清干扰素吖(ErN．丫)和白介素4(IL．4)采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测；血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、CORT，血清总三碘甲状腺原氨酸(T3)、总甲状腺素(T4)，血清生殖内分泌激素

6、(FSH、LH、E2、T、P)及下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CIm)、促甲状腺激素释放激素(耵m)、促性腺激素释放激素(GI】RH)均采用RIA检测。子宫雌激素受体a(E弛)表达采用免疫组化法。4以妇科实寒证、虚寒证模型大鼠为研究对象，比较实寒证、虚寒证形成过程中机体能量代谢的异同。分别在造模不同时间点(3d为一个时间单位)检测组织线粒体能量代谢及氧化损伤相关指标的变化情况。肝脏三磷酸腺苷(』岍)酶、琥珀酸脱氢酶(SDH)及乳酸脱氢酶(LDH)活性采用化学比色法，肝脏ATP含量采用高效液相法，肝糖原(Gn)含量采用葸酮法；子宫超氧化物歧化酶(SOD)活力采用比色法，丙二

7、醛(MDA)含量采用硫代巴比妥法；子宫解偶联蛋白2(UCP2)表达采用免疫组化法。结果：1实寒组与正常组比较，差异代谢产物有葡萄糖、果糖、木糖醇、半乳糖、异柠檬酸、马尿酸、丙氨酸、甘氨酸8种；其中实寒组升高的有葡中文摘要萄糖、果糖、木糖醇、半乳糖、异柠檬酸、马尿酸；降低的有丙氨酸、甘氨酸。虚寒组与正常组比较，差异代谢产物有果糖、麦芽糖、阿拉伯呋喃糖、异柠檬酸、乳酸、马尿酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、软脂酸、硬脂酸、原藻醇12种；其中虚寒组升高的只有乳酸，其余均降低。实寒组与虚寒组之间差异代谢产物有葡萄糖、果糖、异柠檬