高效重组苜蓿中华根瘤菌构建及其耐盐性初探

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1、高效固氮重组曹蓿中华根瘤茁的构建和及其耐盐缝韧探摘要将克隆有四碳二羧酸转移酶基因dctABD，万泓基因和发光酶基因luxAB的重组质粒p瑚奶07经三亲本杂交分别导入苜蓿根瘤菌HNMl、HNM2，HNM4和1021得到HNMI(pHN307)等4个转移接合子。进一步比较研究TpI-IN307在自生培养条件下传代的稳定性，实验结果证明在无抗性选择的情况下，连续转接10次以上，检测所得单菌落发光率都为100％，证明了重组质粒pHN307在苜蓿中华根瘤菌中能够稳定遗传．并采用本室改进的双层钵无菌砂培盆栽法，分别将4个转移接

2、合子和出发菌接种苜蓿品种草原一号，公农一号和图牧二号。结果表明：除用m晰10m屺07)接种图牧二号以外，供试重组菌接种的植株比出发菌在根瘤鲜重、植株地上部分鲜重、根瘤数、瘤重、植株地上部分干重等方面都有一定的提高，表明导入额外拷贝的以0舅基因与dc以BD基因可以提高出发菌的共生固氮能力。其中重组菌HNM4(．pHN307')a和1021(pm归叨在草原一号和公农一号的植株地上部分干重和鲜重较出发菌明显提高。此外，导入dctABD和拈私基因对受体菌I-Ibml，I-INM2、ItI娜v14和1021的结瘤与共生固氮效

3、率的影响还与植物品种有关。就草原一号和公农一号而言，导入重组质粒pHN307的转移接合子可以提高植株地上部分鲜重、植株地上部分干重。但在图牧二号上，HNMZ(pHN307),HNM4(pHN307),1021(pI．-IN307)和其野生型菌株相比，在上述方面并未表现出明显的提高，而且重组菌HNMI(pHN307)却表现出负效应．本研究还检测了转移接合子和苜蓿的耐盐性．结果表明，2．5％NaCl浓度对供试菌株生长有明显的抑制作用，而苜蓿在1．5％Nacl浓度以上环境下就无法生长和结瘤。关键词dctABD，一弘，Lu

4、xAB，苜蓿中华根瘤菌，共生固氮效率，耐盐性离散固氮重组苜蓿中华根瘤菌的构建和及其耐盐性初探AbstI。actArecombinantplasmidpHN307containingdctABD，^弘andluxABgeneswasintroducedintoSinorhizobiummelilotiHNMl，HNM2，HNM4and1021bytri-parantalmating．ThestabilityofpHN307intheuansconjugantsunderfreelivingconditionsWaSa

5、lsoinvestigated，theresultshowthattheplasmidexiststeadilyaftercultivatedmolethan10generationswithoutanyantibiotic。TheresultsofplantpotexperimentsusingcultivarCaoyuanNo．1，GongnongNo．1andTumuNo．2ofMedicagosativaindicatedthattransconjugantcoulddevdopthedataofnodul

6、enumbcf,nodulefreshweight,shootfreshanddryweightmoreOrless，SOweconcludethattheintroductionofdctABDandn私genescould／reprovedthesymbioticnitrogenfixationefficiencyoftherhizobiatested．rI呲HN307)and1021(pmq30'0couldsignificantlyincreaseshootfreshanddryweightOnCaoyua

7、nNo．1andTumuNo．2comparingwithrecipientstrains．Thus，theeffectsORthesymbioticnitrogenfixationofSinorhizabiummelilaawiththeintroductionofdctABDandn／fagenesarealsorelevantwithMedicagoSativavariety．OntheCaoyuanNo．1andGongnongNo．1，theinoculationoftransconjugantcould

8、developshootfleshandd巧weightcomparingwithwildtype,butOUtheTumuNo．2,theinoculationofHNM4(pHN307)，1021(prnN30-0couldnotimprovedtheshootfleshanddryweightsignificantly,andHNMl01-m307)d