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1、灵芝三祜抑制炎症反应的研究摘要：灵芝(Gcmodennalucidu/n)是-，种著名的药用蘑菇，做为传统屮药用于预防和治疗多种疾病。木研究中我们评估了在脂多糖激动巨噬细胞过程中灵芝中提取的三祜的抗炎作川。主要表现在灵芝三祜显著地抑制脂多糖激动鼠RAW264.7细胞中炎症分泌物细胞因子的生成，如肿瘤坏死因子和白细胞介素・6,和炎症介质NO和前列腺素E2o灵芝三祈也能减少RAW264.7细胞中依赖脂多糖的iNOX和COX-2的表达。灵芝三砧的抗炎作用调节通过减少NF-kB-DNA结合活性來抑制转录因子NF-kB,灵芝三话在脂多糖激动巨噬
2、细胞过程中抑制了p65的磷酸化。再者，灵芝三诂抑制脂多糖AF-1-DNA结合活性并减少AP-1子单元c・jun的表达。另外，灵芝三祜通过降低脂多糖诱导的ERK1/2和JNK的磷酸化來抑制MAP激酶的活性，1何不是通过抑制p38来实现。体内实验明显的表现出灵芝三菇也能抑制脂多糖诱导的内售素小鼠体内巨噬细胞中肿瘤坏死因子和口细胞介素-6的牛:成。灵芝三萨除了具有抗炎活性外，灵芝三祜还能通过抑制细胞循环G0/G1-G2M来抑制RAW264.7细胞增殖，G0/G1-G2M的抑制是通过降低细胞循环调节蛋白活性来介导的，这些调节蛋白分别是细胞周期
3、蛋ADI,CDK4和细胞周期蛋ABk总之，灵芝三诂抗炎和抗增殖作用是通过抑制巨噬细胞上NF-kB和APJ信号通道來介导的。关键词：巨噬细胞；炎症；灵芝；三桔；细胞因了；信号转导作用1•前言炎症是一些疾病内在的发病机理。巨噬细胞是人们熟知的炎症反应过程中一种重要的免疫调节细胞。激活的巨噬细胞能分泌一些不同的炎症介质，包括肿瘤坏死因子，白细胞介素・6,ROS,前列腺素E2和NO［l-3］o这些介质过度的或不受调控的生成能介导或恶化一些疾病，包括风湿性关节炎，骨关节炎，败血症，慢性肺炎，结肠溃疡和致癌作用。最近，已经有报道证明了巨噬细胞屮的
4、炎症刺激物能促进肿瘤的生长［4・6］,相反减少巨噬细胞能抑制肿瘤的生长［6］。临床研究表明在一些不同类型的固体肿瘤中肿瘤间质中巨噬细胞密度的增大与不健康的预后表形出显著地相互关联l7-9Jo因此，在治疗炎症疾病和癌症过程中抑制这些炎症细胞的活性和增殖显然成为小分子药物的一种重耍的治疗冃标。在这种观点下，评估各种具有生物活性的植物成分的抗炎作用已经受到了广泛的重视。灵芝蘑菇是这些药用植物屮的一种，其在亚洲国家屮普遍用來治疗多种疾病［10］和做为传统小药用于家庭治疗己经拥有超过2000年的丿力史［11］。在已经报道的灵芝的生物活性和药理活
5、性中，灵芝的抗肿瘤活性引起了人们特殊的兴趣。灵芝抗肿瘤活性的体内和体外实验研究已经证明其能够应用于预防和治疗癌症［12,13］。多糖和三菇是灵芝中两种主要的生物活性成分，以前发现多糖主要是通过免疫调节机制来产牛作用［14,15］,而三命是直接抑制癌症细胞牛长和侵染癌症细胞［10,16,17］。虽然已经报道了灵芝多糖和灵芝三祜具有很多纶物活性和药理作用，但没阐述过灵芝三砧抗炎活性的分子机制。为了进一步理解灵芝三砧的抗炎作用，我们研究其在由革兰氏阴性菌细胞壁成分脂多糖刺激的鼠巨噬细胞RAW264.7屮的抗炎作用。脂多糖是通过通过一些转录因
6、子如AP-1和NF-kB作用于受体-4加强一些炎症物质的表达來产生活性，例如肿瘤坏死因了，白细胞介素・6,iNOX和COX-2［18］oAP-1和NF-kB的活性是由多种MAP激酶来调节的,包括ERK1/2,p38MAP激酶和JNK,和介导NF-kB转入细胞核的IKKs［18-22］o本研究屮，我们评估了灵芝三砧在巨噬细胞RAW264.7小的作用。这里，主要表现在灵芝三砧抑制多种炎症介质的产生和诱导抑制细胞循环。这些结果表明灵芝三话可以用来做为一种抗炎和抗增殖药物。2•材料与方法2.1灵芝三祜的制备与鉴别灵芝三话购于pharmanex
7、公司。提取物按以下步骤制备：将灵芝磨菇粉碎并用95%甲醇逆流提取。甲醇提取物减压浓缩成干燥物。甲醇提取物用HPLC分析，条件为C-18柱用乙月青-0.1%三氟醋酸溶液(35/65—95/5,50min)进行洗脱，流速为lml/min.以前发表的文章屮用光谱屮检测分离三诂并用核磁共振和质谱鉴定［23・25］。另外，我们最近用LC/MS方法构建了灵芝三祜生物活性成分中三菇类代谢产物指纹图谱并鉴定了灵芝中的ganodericacidA,F,H,Mh,SI,ganosporericacid,lucidenicacidB,D,DI,El,L,a
8、ndmethyllucidenateG。再者，在可用的标准卜•我们确定了灵芝算A,H,F的含量，分别是3.88ug/mg,1.74ug/mg,0.95ug/mgo本研究屮，我们将灵芝三话提取物的总三话溶于DMSO屮配成浓
