几种小分子物质对胰蛋白酶部分性质的影响研究

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1、四川大学硕士学位论文几种小分子物质对胰蛋白酶部分性质的影响研究生物化学与分子生物学专业研究生邓静指导教师刘克武摘要：胰蛋白酶(trypsin，E．C．3．4．21．4)作为一种重要的消化酶，在食品、制药、皮革、纺织、化妆品、畜牧、医疗及生物试验中都有着广泛的应用。因此，本论文主要研究了几种小分子物质对胰蛋白酶部分性质的影响。即选用芦丁作用于胰蛋白酶，研究芦丁对酶的紫外差光谱、荧光光谱的影响。研究了多元醇类、单糖和寡糖在不同浓度、不同温度、不同时间以及不同pH值条件下对酶活力的影响以及部分酶保护剂对酶荧光光谱的影响。通过以上的实验和测试分析，本论文得出了以下创

2、新的意义的研究成果：1．在生理DH条件下，芦丁作用胰蛋白酶后的紫外吸收差谱在23511／11和263nrll分别出现弱的正吸收峰和强的正吸收峰。随芦丁浓度的增加，其峰值不断增大，吸收峰波长基本不变，说明芦丁的加入改变了胰蛋白酶的构象，使埋藏在分子内的生色基团暴露于分子表面。2．在激发光波长为278nIn时，当[芦丁】：【胰蛋白酶]-5：l时，胰蛋白酶的最大发射波长^锄未发生变化，同样为335．2nm。但是相对荧光强度则由500．7下降到158．9，其强度减少了68．3％。在激发光波长为295nm时，胰蛋白酶的最大发射波长^em发生了0．2nm的红移，即从32

3、9．8nm变为330．0nm。然而相对荧光强度却从274．6下降到114．7，其强度减少了58．2％。结果表明，芦丁的加入未明显改变胰蛋白酶的发射峰位置，但随着浓度的增加，其内源荧光强度却有规律地降低，即芦丁对胰蛋白酶的荧光有淬灭作用。3．利用295am激发波长下得到的荧光光谱结果，进一步绘制了芦丁对胰蛋白酶的Stem．Volmer淬灭曲线，得线性方程Fo／F=5．50×104[Q]+1．Ol以及婴型查兰堡主兰竺堡塞k=5．50x10”(mol／L)～s一。推断得出，芦丁对胰蛋白酶的荧光淬灭以静态淬灭为主。利用Lineweaver-Burk线性方程得到芦丁和

4、胰蛋白酶的结合常数K．=6．88x104(tool／L)“和结合位点数n=1．02，进一步推断芦丁与胰蛋白之间有一个结合位点。4．研究了多元醇类、单糖和寡糖在不同浓度、不同温度、不同时间以及不同pH值条件下对酶活力的影响。筛选出酶稳定性保护效果好的组别及最佳浓度为10％的甘油、20％的乙二醇、3％的葡萄糖、2％的麦芽糖、3％的蔗糖。甘油和乙二醇在高温条件下，对酶热稳定性有一定的保护作用，但作用较弱，而葡萄糖、麦芽糖、蔗糖对酶热稳定性的保护作用较强。在不同pH条件下，经过保护剂葡萄糖处理后的处理组，pH的稳定性明显高于未经保护剂处理的对照组，使该酶的pH稳定性

5、范围扩大为6～9。从而实现了模拟工业条件，比较并优化出提高胰蛋白酶稳定性的保护剂，为胰蛋白酶制剂的生产和应用提供了部分理论数据。5．通过酶保护剂对酶荧光光谱的影响研究，发现，在两个波长的激发光条件下，经酶保护剂处理后的胰蛋白酶的最大发射峰大部分发生红移，相对荧光强度减小，但是影响程度较小，说明加入保护剂后，色氨酸所处的微环境极性增加，酶的构象发生了轻微的改变。关键词：胰蛋白酶；抑制剂；保护剂；紫外差谱；荧光光谱V四川大学硕上学位论文StudyontheEffectoftheSmallMoleculesonthePartPropertiesoftheTryps

6、inMajorBiochemistryandMolecularBiologyGraduateDengJingAdvisorLiuKewuAbstract：Asanimportantdigestiveenzyme，thetrypsin(E，C．3．4．21．4)hasbeenwidelyusedinfood，pharmacy,leather，weave，cosmetic，farming，medicaltreatmentandbiologyexperiment．Therefore，inthispapertheeffectofthesmallmoleculesOn

7、thepartpropertiesofthetrypsinWasstudied．Therutinwasusedtoactonthetrypsin，theeffectofrutinonthetrypsinwasstudiedbyUVdifferentialspectrumandfluorescentspectrum．Theeffectofalditol，monosaccharide，oligosaccharideindifferenteoneentratioll’temperature，timeandPHvaluesontheerlzym．e’sactivit

8、yWasstudied．Theeffectofpro