c基因在褐飞虱中的原位杂

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1、4-C4基因在褐飞虱中的原位杂交分析陈智龙广州大学生命科学学院摘要本研究以筛选褐飞虱唾液腺抑制差减杂交文库得到的差异表达明显的基因4-C4为研究对象，通过体外扩增、制备探针、褐飞虱石蜡包埋、切片，杂交、免疫反应、显色反应等方法对基因4-C4进行了RNA原位杂交分析，结果表明，此基因主要在褐飞虱的唾液腺部位表达，本研究结果为进一步分析基因4-C4的功能奠定了基础。关键词褐飞虱石蜡切片探针杂交13/17Theanalysisofin-situhybridizationof4-C4genesinthebrownplanthopperChenZhilong

2、SchoolofLifeSciences，GuangzhouUniversityABSTRACTInthisstudygene 4-C4 wasusedasprobetolocateitsexpressionin brown planthopper(BPH)tissues,whichisscreenedfromsuppres--sion subtractive hybridizationlibrary ofBPHsalivarygland.Byinvitroamplificationofgene4-C4,preparationof probes,e

3、mbeddingBPHbyparaffin,hybridization, immuneresponse, dyeingandsoon.Ourresultshowedthatgene4-C4ismainlyexpressedin the salivaryglands of the brown planthopper.Theresultinourresearchwouldlaythefoundation for further functional analysisof gene 4-C4.KEYWORDSBrownplanthopper;Paraff

4、insection;Probe;hybridization；13/17目录1前言…………………………………………………………………………………12材料与方法……………………………………………………………………………22.1实验材料……………………………………………………………………………22.2实验试剂的配制……………………………………………………………………22.3实验步骤…………………………………………………………………………42.3.1制作褐飞虱石蜡切片2.3.1.1抽气…………………………………………………………………………42.3.1.2

5、脱水…………………………………………………………………………52.3.1.3浸蜡…………………………………………………………………………52.3.1.4包埋…………………………………………………………………………52.3.1.5切片…………………………………………………………………………52.3.2杂交之前的准备工作…………………………………………………………52.3.2.14-C4基因的体外扩增………………………………………………………52.3.2.1.1制备感受态细胞………………………………………………………52.3.2.1.2转化………………

6、……………………………………………………62.3.2.1.3提取质粒………………………………………………………………62.3.2.2酶切………………………………………………………………………62.3.2.3纯化酶切产物……………………………………………………………72.3.2.4制备地高辛标记的探针…………………………………………………72.3.3原位杂交………………………………………………………………………82.3.3.1预杂交………………………………………………………………………82.3.3.2杂交……………………………………………………………

7、……………82.3.3.3杂交后处理…………………………………………………………………82.3.3.4免疫反应……………………………………………………………………82.3.3.5显色反应……………………………………………………………………92.3.3．6封片观察…………………………………………………………………93结果与分析……………………………………………………………………………93.1体外扩增提取质粒后电泳……………………………………………………913/173.2酶切后电泳……………………………………………………………………103.3酶切后再纯

8、化质粒电泳……………………………………………………103.4原位杂交后结果分析…………………………………………………………