安徽科技学院大学生创新基金课题结题报告书---彭程

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1、安徽科技学院大学生创新基金课题结题报告书课题编号：安徽科技学院大学生创新基金课题结题报告书项目名称：低剂量秋水仙素诱导甜叶菊多倍体技术体系的创建主持人：彭程联系方式：14790086298所在学院：植物科学学院指导教师：崔广荣教授联系方式：13855066873所在学院：植物科学学院执行年限：2012年1月至2012年12月资助经费：（千元）实际使用经费：（千元）安徽科技学院科研处制二O一二年十一月8安徽科技学院大学生创新基金课题结题报告书关于填报《结题报告》的说明一、课题负责人应认真阅读《安徽科技学院大学生创新课题管理办法》（暂行），

2、在课题研究工作的基础上，实事求是地撰写《结题报告》并提供必要的附件材料，保证填报内容真实、数据准确。二、课题所在学院按规定要求认真审查，确保附件材料复印件和原件的一致性，并加盖学院公章。三、《结题报告》由报告正文、研究成果目录表、审核意见和附件等部分组成。四、本报告书一式1份，纸张大小要求A4。8安徽科技学院大学生创新基金课题结题报告书一、课题完成情况（请严格按下列题纲填写，可根据需要加页）1、完成的研究内容，采取的方法，取得的成果、结论。2、课题的创新点，理论价值及实际意义。3、存在的问题。（一）完成的研究内容我课题研究小组就我们的创

3、新课题——低剂量秋水仙素诱导甜叶菊多倍体技术体系的创建查阅了大量资料，进行了多项操作步骤及操作技术如接种技术的探索，进一步优化了操作步骤，有效的提高了试验成功率；同时在现有甜叶菊离体培养技术基础上，进一步优化适于多个甜叶菊品种的茎段侧芽高效再生植株技术体系，主要探讨最佳激素组合秋水仙素浓度及培养条件等努力完成我们的所作的研究。1、对现有的秋水仙素诱导甜叶菊多倍体技术进行了深入学习，了解其中的优缺点，发现现有的方法中操作步骤多、操作复杂、易污染、诱变频率不高等缺点，相比低剂量秋水仙素诱导甜叶菊多倍体技术有效的缩短了操作步骤、简化了实验流程

4、、减少了污染的概率，大大的提高了诱变频率。2、不同品系的甜叶菊组培特性差距较大，为了找到适合实验所用8个品系甜叶菊茎段侧芽高效再生的激素组合我们小组对不同品系甜叶菊进行了不同激素浓度的梯度实验，最后发现MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L8安徽科技学院大学生创新基金课题结题报告书+琼脂粉5.0g/L+蔗糖30g/L适合8个品系甜叶菊的茎段侧芽高效再生。3、设定不同浓度秋水仙素（0.01%、0.02%、0.05%、0.08%、0.12%）对甜叶菊茎段侧芽在苗再生过程中进行诱变处理（中途无需清洗、无需更换培养基，以简化程序），

5、并设空白对照（无菌水处理），实验过程中通过过滤灭菌处理秋水仙素，并使用移液枪将秋水仙素滴加于事先去叶并培养了两天的茎段苗上，进一步观察诱变，并记录实验数据，发现秋水仙素浓度为0.05%诱变频率较高4、多倍体初代培养组培苗一般较难生根大约30天后将处理过的甜叶菊材料整株移至生根培养基中（1/2MS+IAA0.5mg/L+琼脂粉5.0g/L+蔗糖30g/L）诱导生根5、多倍体鉴定：多倍体与对照植株形态学特征比较与分析；多倍体与对照植株染色体数比较与分析。多倍体组培苗较二倍体组培苗粗壮、叶片较窄小，株高较矮。通过切取甜叶菊根尖组织制片可观察甜

6、叶菊多倍体细胞细胞核大染色体多等特征。6、对操作步骤如茎秆去叶、滴加秋水仙素等操作进行了探讨研究，改良技术提高了效率减少了污染。采取的方法：1、查阅相关文献8安徽科技学院大学生创新基金课题结题报告书利用学校图书馆、互联网等途径查阅有关植物组织培养、多倍体诱变等材料文献，打好理论基础2、培养基的优化采用不同浓度梯度的激素组合(NAA0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.3mg/L、0.4mg/L、0.5mg/L、0.6mg/L;6-BA0.5mg/L、0.7mg/L、0.9mg/L、1.1mg/L、1.2mg/L、1.4mg/L

7、、1.6mg/LMS糖30g/L琼脂5g/L)对8个品系的甜叶菊进行培养观察统计，最后得出MSNAA0.2mg/L6-BA1.0mg/L糖30g/L琼脂5g/L激素组合最佳，不同品系甜叶菊在该激素组合下长势良好3、设定不同浓度秋水仙素诱变处理将甜叶菊茎段去叶处理培养2-3天后将不同浓度的秋水仙素（0.01%、0.02%、0.05%、0.08%、0.12%）滴加于茎段苗的生长点，放入组培室培养观察（主要观察出芽天数和死亡率）。4、多倍体的鉴定将诱变处理后的甜叶菊进行生根处理（接种至1/2MSIBA0.5mg/L糖30g/L琼脂5g/L培养

8、基中培养），取出根至于8-羟基喹啉室温下处理2小时，卡诺氏固定液中固定24小时，再放入盐酸、95%乙醇1:1解离液中解离10min后取根尖1-2mm制片置于显微镜下观察细胞核及染色体8安徽科技学院大学生创新