双向凝胶电泳筛选子宫内膜癌淋巴转移相关蛋白质

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1、上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分

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3、GO）分期系统依赖术后组织学检查结果，属“事后”（手术后）分期，不可能在术前进行淋巴结转移评估，严重影响了术前对最佳治疗方案的选择。故自从1988年FIGO建议对子宫内膜癌患者行盆腔和腹主动脉旁淋巴结清扫以来，对早期子宫内膜癌患者是否应该进行淋巴结清扫一直有争论。有些学者认为，对于无手术风险的子宫内膜癌患者，应常规进行完整的分期手术，以此明确肿瘤的准确期别，避免术后的一些不必要的治疗。但盆腔和腹主动脉旁淋巴结清扫会造成严重的手术并发症，如淋巴囊肿、淋巴水肿、大量出血、肠梗阻、泌尿道和血管损伤，故有学者对其临床应用价值，尤其在低淋巴结转移风险患者中的价

4、值产生了质疑。所以，术前评估子宫内膜癌淋巴结转移，选择合适的手术方式，避免手术残留和不必要的系统性淋巴结清扫，是目前需要解决的关键问题。目前比较公认的影响淋巴结转移因素主要是组织病理学参数，比如肌层浸润、分化程度和组织病理学亚型常被用来评价淋巴转移的危险程度，并可以指导是否进行辅助性治疗。通常根据下述标准将子宫内膜癌分为两组（高危组和低危组）；高危组的标准是：肌层浸润大于1/2和/或腺癌3级或浆液性乳头状癌或透明细胞癌，低[1]危组的标准是：肌层浸润小于1/2和腺癌1或2级。高危组患者需行淋巴清扫。但半数以上淋巴清扫结果是阴性。同时，低危组中亦有相当

5、程度的淋巴结转移率。因此，需要找到一些能够更加准确反映是否有淋巴结转移的参数。过去的一些研究或采用免疫组化方法从蛋白水平进行研究，或采用PCR法等从基因水平研究相关生物学指标包括调节肿瘤生长（表皮生长因子受体）、血管生成（血管内皮生长因子）、侵犯（正调节因子金属蛋白酶，负调节因子钙粘附蛋白E）等，-2-上海交通大学硕士学位论文[2-4]来试图评估是否存在淋巴结转移。然而上述研究仅关注到影响生物学行为的某一已知因素，实际上是进行的证实性而非探索性研究。随着人类基因组测序工作的完成，人们认识到基因仅仅是遗传信息的载体，而生命活动的执行者——蛋白质被提到了

6、前所未有的高度，因此而诞生的蛋白质组学[5]（proteomics）成了生命科学研究的一个新前沿。目前以双向凝胶电泳（twodimensionalgelelectrophoresis,2-DE）和质谱（massspectrometry,MS）为代表的蛋白质分离、鉴定技术及生物信息学是蛋白质组学研究中的支撑技术。双向凝[6]胶电泳最主要的二个优点是高分辨率和高通量；它能同时分离、检测几千个蛋白点，无论这些蛋白质是已知的还是未知的。应用双向凝胶电泳和质谱分析方法，可以灵[7]敏的分离和鉴定蛋白质。本课题选取了2002年至2005年我院收治的8例子宫内膜癌

7、患者（手术方式均为全子宫、双附件切除＋盆腔淋巴结清扫），分为子宫内膜癌淋巴结转移阴性组（n＝4例）和子宫内膜癌淋巴结转移阳性组（n=4例）4例因良性病变性诊刮术后获得的正常子宫内膜。所有标本在实验前均经病理科医师再次确诊。3组组织标本分别进行双向电泳，并对选取的差异表达蛋白质点行MALDI-TOF-MS分析鉴定，以寻找与子宫内膜癌淋巴转移相关的蛋白质。-3-上海交通大学硕士学位论文材料与方法2.1组织标本实验取正常子宫内膜组织，淋巴结阴性子宫内膜癌和淋巴结阳性子宫内膜癌组织各4例，共三组进行双向凝胶电泳。肿瘤标本为我院收治的行完整分期手术的子宫内膜癌

8、患者手术标本，正常子宫内膜为因子宫肌瘤行诊刮术后所得的组织标本。标本均在手术室取材后立即置于液氮中保存，所有