恐惧应激对雄性大鼠生殖内分泌及生精细胞凋亡的影响

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1、恐惧应激对雄性大鼠生殖内分泌及生精细胞凋亡的影响中文摘要应激(Stress)是指机体在受到各种内外环境因素刺激时所发生的非特异性全身反应。长期处于应激状态，机体的自稳态将改变，从而诱发机体产生疾病。遭受战争环境刺激的军人丧失了应付能力，并伴有精神障碍，对此称之为作战应激反应(eombmStressreactionCRS)；发展到后期会导致创伤后应激性障碍(post-traumaticstressdisorder,PTSD)。本实验建立战争恐惧应激大鼠模型，检测恐惧应激对生殖的影响。研究表明急性应激组与对照组相比，大鼠体重、睾

2、丸重量、附睾重量、精子数量没有明显变化(P>o．05)，睾丸HE染色显示睾丸结构无明显交化，免疫组亿显示3p．HSD表达降低，Westernblotting分析3p—HSD降低了7％；慢性应激组与对照组相比，大鼠体重、睾丸重量、附睾重量、精子数量都有显著差异，P<0．05。睾丸HE染色显示睾丸内生精小管细小，管腔内生精细胞稀少，免疫组化显示3p—HSD表达降低，Westernblotting分析3p—HSD降低了19．6％。因此表明随着应激时问的延长生殖器官功能降低。此外，我们用酶联免疫吸附法检测应激组与对照组大鼠血清FSH

3、、LH和T水平，发现急性应激组大鼠血清FSH(2．74-0．4)ng／ml、LH(3．1±o．3)ng／ml和T(3．94-0．5)rig／mr水平略高于对照组大鼠FSH(2．64-0．2)ng／n“、LH(2．8士0．6)ng／ml和T(2．7±0．2)nCml水平，但无显著差异(P>O．05)；亚急性应激组大鼠血清FSH(1．9±O．5)ng／ml、LH(2．9±O．3)ng／ml和x(1．9±1．1)ng／n_lI水平都低于其对照组大鼠的FSH(2．3土0．4)ng／ml、LH(3．0±O．5)ng／na和T(2．94

4、-1．3)ng／nll水平，但都无显著差异(P>o．05)；慢性应激组大鼠血清FSH(1．6士0．5)rig／aft、LH(2．1土0．4)ng／ml和T(0．6±0．3)ng／ml都低于对照组大鼠血清FSH(2．2士0．3)ng／ml、LH(3．0士0．8)ng／ml和T(3．0±0．4)ng／ml，其中大鼠血清LH水平的变化有显著差异(P

5、。我们研究表明急性应激组与对照组相比，免疫组化显示Annexin5都定位在问质细胞、支持细胞和成熟的精子头部，Westernblotting分析发现Annexin5的表达降低了10．8％；慢性应激组与对照组相比，免疫组亿结果显示Annexin5在精子头部的定位逐渐减少，应激1w和2w组，未见到Annexin5定位于精子头部，到了应激的3w和4w,发现Annexin5重新定位于精子的头部，而在间质细胞和支持细胞上的定位模式没有显著变化．Westernblotting分析发现Annexin5的表达降低了17．4％。我们用RT-P

6、CR检测了Annexin5mRNA的表达。应激组与各自的对照组相比，Annxin5mRNA的表达都低于对照组，其中亚急性组与对照组相比有显著差异(P<0．05)。随着应激时问的延长，Annexin5mRNA由降低逐渐向生理水平回升。这些数据表明，应激改变大鼠睾丸中Annexin5的正常表达模式。最后，我们还用RT-PCR栓瓤4了大鼠睾丸Caspase一3mRNA和Bax／Bel．2mRNA表达的变化。急性应激组与对照组相比，Caspase．3mRNA的表达水平无显著变化(P>0，05)，而亚急性应激组、慢性应激组与其对照组相

7、比都有显著差异(P<0．05)．与对照组相比，急性应激组Bax／Bcl。2mRNA比值无显著变化(P>0．05)，而亚急性应激组有显著差异(P<0．05)，慢性应激组有极显著差异(P<0．001)。TUNEL结果表明急性应激组与对照组相比，生殖细胞的凋亡指数无显著差异(P>0．05)，而亚急性应激组和慢性应激组与对照相比生殖细胞凋亡指数有极显著差异(P<0．001)。因此，长期恐惧应激可导致大鼠睾丸生精细胞发生凋亡，而这种凋亡有Caspase．3及bax和bel．2等的参与。恐惧应激作为心理应激的一种形式对啮齿类动物睾丸的结

8、构和功能以及生殖内分泌等都有着很大的破坏和干扰作用，并且促使睾丸生精细胞的凋亡，提示恐惧应激对人类生殖可能有相似的影响．因此，如何减少恐惧应激损伤，对于维持正常生殖功能有着重要的意义。关键词：恐惧；应激；生殖IVAbstractEffectsofStressInducedbyFearonR