bruton酪氨酸激酶在严重烧伤小鼠急性肺损伤发病中作用和机制

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1、Bruton酪氨酸激酶在严重烧伤小鼠急性肺损伤发病中的作用和机制摘要一、研究背景严重烧伤会导致机体内环境发生剧烈变化。创伤应激、热力直接损伤、组织低灌注等因素会引起单核巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、血小板、内皮细胞等炎细胞活化，促炎性细胞因子表达增多；血管内皮细胞和白细胞受到强烈刺激后粘附分子表达及活化增强，而且随着两者粘附的加强，激活的白细胞出现呼吸爆炸、脱颗粒从而释放出大量蛋白溶酶、活性氧、花生四烯酸等代谢产物及促炎细胞因子，造成血管内皮细胞和其他组织细胞的广泛损伤。上述病理生理过程可概括为：严重烧伤一一促炎细胞因子表达增多一一白细胞与血

2、管内皮细胞(endothelialcell，EC)粘附激活、释放大量炎症介质一一失控的全身炎症反应综合征(systemicinnammato叫responsesyndrome，SIRS)。为了阻断SIRS的发生和发展，近年来国内外提出了一些针对单个细胞因子的治疗，例如细胞因子的单克隆抗体和可溶性受体等，但在临床试用均无明显效果，甚至还有增加死亡的报道。分析其原因，主要是细胞因子及其代谢产物种类众多，构成了一个十分复杂的网络，仅仅针对其中某一种或几种进行干预，往往达不到目的。但细胞因子作用于靶细胞时所必须经过的受体后信号转导通路则屈指可数，如果着

3、重研究炎性介质过度释放的信号转导机理，并对关键信号通路进行调控，对于阻断严重烧伤时失控性的全身炎症反应可能较之于针对某一单个炎症介质更为有效。T01l样受体(Toll．1ikereceptors，TLRs)是一类病原分子识别受体家族，它不仅能识别病原体相关分子模式(PAMPs)，其某些成员，尤其是TLR4也可识别无菌性损伤后释放的众多内源性分子即损伤相关分子模式(DAMPs)。外源LPS或内源性配体与TLR4结合后，活化MvD88和TRIF两条信号途径，前者活化NF．KB和MAPK信号通路，后者活化NF．KB和干扰素调节因子3信号通路。TLR4

4、通过这些信号途径诱导产生一系列的炎症介质包括细胞因子、趋化因子等，从而产生强有力的炎症和免疫反应。近年来研究表明，TLR4及其信号通路介导的天然免疫在感染和非感染性疾病引起的局部和全身炎症反应发生、发展的动态过程中具有重要作用。Bruton酪氨酸蛋白激酶(Bmton‘styrosinekinase，Btk)是胞浆非受体酪氨酸蛋白激酶Tec家族成员之一，它是前B淋巴细胞发育所必需的。Btk的细胞表达谱较窄，仅限于髓系细胞，不表达于T淋巴细胞及组织浆细胞。Btk可增强TLR信号转导并最终激第二军医大学硕士学位论文活NF．1cB和MAPKs信号通路，

5、继而启动炎性基因表达。研究表明，Btk基因突变或缺失的单核／巨噬细胞、肥大细胞和外周血单个核细胞对LPS刺激不敏感，TNF一0【、IL-1p和iNOS表达明显下降，进一步研究发现Btk对LPS诱导的细胞因子表达的调控作用主要是通过NF．1cB和p38激酶介导的。目前关于Btk信号通路与炎症关系的研究仍多限于体外观察，它在体内炎症反应中的调控作用仍知之甚少。临床观察表明，肺脏是烧伤后功能不全发生率最高和发生时间最早的器官。肺脏不仅是气体交换的器官，也是一些细胞因子和激素产生和灭活的场所，加上肺脏本身在解剖学上相对较脆弱，易受到各种致病因素的打击，

6、因此肺脏足烧伤后炎性损害的主要靶器官之一。由于失控的炎症反应是ALI发病的病理生理学基础，Btk作为众多炎性介质合成与释放的重要上游信号转导通路，可能在ALI的发生与发展过程中发挥了重要作用。因此，本课题定位于肺组织，研究Btk信号转导通路与严重烧伤早期炎症调控的关系以及其与烧伤后肺脏损伤的关系。二、研究目的1．观察Btk信号通路在严重烧伤小鼠肺脏中的表达及活化情况，初步探讨Btk信号通路在严重烧伤后急性肺损伤发病及局部炎症反应中的作用。2．观察抑制Btk活化后，严重烧伤小鼠肺组织局部信号蛋白的动态变化情况，探讨Btk在烧伤诱导的小鼠肺组织中M

7、APK和NF．KB及相关通路参与炎性肺损伤发病机制的可能效应。三、研究内容第一部分Btk激酶活化在烧伤后急性肺损伤发病中的作用健康成年的雄性C57BL／6小鼠252只，随机分为假烫对照组(C组)、烧伤组(S组)，烧伤+LFM．A13组(L组)。各组小鼠均予备皮、麻醉处置，S组、L组小鼠后躯干置98℃沸水中12s，复制30％TBSAIII。烫伤模型。L组在烧伤前1h及烧伤后6h，按4．2m眺g的剂量腹腔内注射LFM．A13，C、S组则予等量平衡液。按ParklaIld公式4ml／(埏木1％TBSA)计算总补液量，分别于伤后即刻、6h时相点分别腹腔

8、注射总补液量50％的平衡液；C组不予烧伤及补液。各组于伤后即刻、O．5h、1h、3h、6h和12h共6个时相点，各取6只小鼠的肺脏以10％中性福尔马林