【7A文】核酸检测在采供血机构中的实际应用.ppt

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1、核酸检测在采供血机构中的实际应用深圳市血液中心曾劲峰主要内容一、在我国采供血机构开展核酸检测的必要性二、建立血液筛查核酸检测实验室的经验三、深圳市血液中心核酸检测情况介绍四、NAT阳性结果与ELISA检测结果关联性分析一、在我国采供血机构开展核酸检测的必要性：1、目前我国采临床用血正面临日益严峻的血液安全问题2、ELISA血清学检测技术的一些固有缺陷即窗口期、灵敏度、罕见的亚型及变异以及静默感染几个方面正成为提高用血安全的瓶颈ELISA--血液筛查的现现状酶联免疫吸附实验（enzyme-linkedimmunosorbe

2、ntassay，ELISA）目前已在临床及血液筛查领域得以广泛应用在有效控制输血感染传染性疾病方面发挥著重意要作用随着医疗技术的提高以及对健康的日益关注，人们对用血安全提出了更高的要求ELISA技术存在的一些固有缺陷，正成为提高用血安全的制约瓶颈一采供血机构开展核酸检测的必要性病毒亚型和病毒变异免疫静默感染实验人员操作失误病毒感染的窗口期制约ELISA法提高血液筛查阳性率的因素“窗口期”漏检是影响血液安全的主要因素血液筛查核酸检测技术应用目前病毒感染“窗口期”献血是对血液安全的最大威胁。而核酸检测技术通过直接检测病毒的核

3、酸分子，可以明显缩短病毒的检测时间血液筛查核酸检测技术的应用项目ELISA窗口期(天)项目NAT窗口期(天)HBsAg56HBV25抗-HCV72HCV59抗-HIV22HIV11核酸实验室的建立1、首先应满足“二个规范”的要求《血站质量管理规范》（卫医发[2006]167号）《血站实验室质量管理规范》（卫医发[2006]183号）2、科学合理的设置核酸实验室的功能分区原则上应设置四个独立的工作区域:试剂耗材储存和准备区标本处理混样区样本制备（核酸纯化）区和扩增检测区（采用全自动核酸检测系统该区可以合并为一个区域）建立血

4、液筛查核酸检测实验室的经验核酸实验室的建立四个区域空间上必须做到：1、完全相互独立的2、各区域无论是在空间应始终处于完全的分隔状态3、不能有空气的直接相通。4、有独立的通风系统建立血液筛查核酸检测实验室的经验NAT试剂及检测系统的选择---结合自身实际情况合理配置仪器设备和检测试剂１.样品集中化大批量检测2.具备自动化程度较高的标本汇集系统３.核酸提取系统、核酸扩增及结果判读系统自动化4.能充分满足血液筛查核酸检测工作在高通量、高自动化、高信息化管理方面的需求建立血液筛查核酸检测实验室的经验检测设备必需满足实际工作需要核

5、酸实验室管理软件的开发和利用11.同时开发与核酸检测相关的管理软件模块与实验室的LIS系统和血液中心血液管理系统链接。22.实现计算机对标本的锁定、汇集、提取、扩增、结果发放的数字化管理及检验结果自动控制系统。建立血液筛查核酸检测实验室的经验建立科学合理查核酸检测策略1、NAT与ELISA检测的配合，先做血清学检测再做核酸检测2、NAT与ELISA平行检测ELISA阴性样品混合检测流程图工作流程建立核酸检测阳性捐血者的追踪程序1.对ELSIA非反应性，核酸检测呈阳性的捐血者进行追踪调查（同时注意捐血者的个人隐私）。2.定

6、期复检测定献血者体内病毒的血清学变化情况，为核酸检测在血液筛查中的应用提供科学依据。1、NAT与ELISA检测的配合，先做血清学检测再做核酸检测2、NAT与ELISA平行检测核酸检测实验室的分区设置：1、试剂准备区2、标本处理区3、核酸检测区域具有独立的通风系统，配有二套独立的制冷系统深圳市血液中心现阶段核酸检测工作汇报检测系统：Tigris全自动核酸系统检测试剂：TMA－HBV/HCV/HIV-1检测试剂标本上样量：500ul/IDT深圳市血液中心现阶段核酸检测工作汇报1、检测试管：美国BD公司5ml、EDTA、惰性分

7、离胶试管。2、所有固定捐血点配备斜角离心机，4小时内3000转/5分钟内离心2-8‘C低温保存，分二次送回血液中心3、上样前3000转/20分钟离心后检测。深圳市血液中心现阶段核酸检测工作汇报检测模式:1、二遍ELISA（进口试剂、国产试剂各一遍），NAT平行检测。2、机采血小板纳入常规核酸检测。深圳市血液中心现阶段核酸检测工作汇报NAT检测报告的利用：1、NAT结果不纳入血液批放行控制，但在血液发往成品库由血液管理系统进行“标记控制”，只有完成NAT的血液才可允许发出。2、ELISA、NAT同时（＋）不做鉴别实验，血液

8、淘汰。3、ELISA（－）、NAT初筛（＋）血液淘汰，保留捐血资格。做鉴别实验。4、捐血者追踪。深圳市血液中心现阶段核酸检测工作汇报实验室的防污染措施：1、仪器设备进行日维护前用巴斯消毒液清洁表面。2、工作台面铺上一次性防污染实验吸水纸，每天更换。3、空气消毒采用紫外灯和75%酒精喷洒并用。深圳市血液中心现阶段核酸检