磷脂酰胆碱的分离提取与松萝酸脂质体的研究

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1、郑州人学硕f：学位论文摘要本论文分为两部分开展实验。第一部分以蛋黄粗磷脂作为原料分离提纯得到ESO(磷脂酰胆碱PC的含量在80％以上)以及深加工产品E98(磷脂酰胆碱PC的含量在98％以上)，并对两种产品的质量做出评价。E80的质量评价包括酸值、碘值、皂化值、有关物质、水分等；E98的质量评价除包括上述E80各检测项之外，用’H-NMR和”C-NMR图谱对PC的结构进行了确证。并用HPLC分析了两种产品中各磷脂组分的种类和含量。第二部分是使用第一部分分离提纯得到的E98，与胆固醇筛选合适的配方包埋药物松萝酸制备松萝酸脂质体。对松萝酸脂质体进行质量评价，包括粒径测量、药脂比大小、载药量

2、高低、包封率高低等。并对贮减了一个月的脂质体进行了稳定性研究。采用有机溶剂沉淀法对蛋黄粗磷脂进行处理。依次用丙酮和无水乙醇溶解浸泡该磷脂粗品，过滤除去不溶性杂质；用重蒸丙酮沉淀得到成品粗品；用活性炭进行脱色处理；95％乙醇进行精制；重蒸丙酮二次沉淀后在冻干设备上冻干制得成品。按2005年版《中华人民共和国药典》有关规定对成品进行质量评价。经分析采用有机溶剂沉淀法制备的成品各质量参数均符合宝鸡力邦生物工程有限公司的企业内部自控标准。产品性能达到了德国Lipoid公司生产的E80产品的水平，完全可以替代该产品使用。将制得的E80作为原料，采用柱层析色谱法深加工得到高纯磷脂产品E98。上柱

3、的沈脱液采用氯仿和甲醇的混合溶媒。TLC进行实时检测，检测结果作为更换沈脱液中氯仿和甲醇比例的判断依据。将洗脱液按所含物质种类的不同分批收集浓缩后脱色，在重蒸丙酮中沉淀、冻干设备上冻干制得成品E98。按E80的相关步骤对深加工产品进行质量评价。结果得到的成品纯度在98％以上。用核磁共振仪对E98进行1H-NMR和’3C．NMR的分析确定了其结构。将E98和胆固醇作为基础原料，筛选合适的配方工艺制备松萝酸脂质体，并评价了其质量。建立了松萝酸脂质体的HPLC色谱条件和包封率的测定方法。HPLC色谱条件是用c18反相色谱柱，(250mmx4．6mm，51a)，流动相组成为甲醇：PBS(pH

4、为5．0左右)=70：30(体积比)，流速为lml／min，紫外检测波长为284nm。包封率的测定方法是用自制的SephadexG．25葡聚糖微型凝胶色谱柱分离脂质体和游离药物，蒸馏水作为洗脱剂，用HPLC检测脂质体中药物和游离药物的含量，郑州人学顾}二学位论文计算出松萝酸脂质体的包封率．结果表明，E98和胆固醇以70：30(mol：m01)为配方制备的脂质体，可以包封松萝酸药量达lmg／50mg左右，脂质体的粒径为130-a：20nm，包封率在90％以上。将贮存一个月后的脂质体再进行质量评价，发现脂质体粒径较以前有所变大。这和PC为中性磷脂有关，符合文献报道的情况。包封率也有所下降

5、。关键词：卵磷脂；质量评价；脂质体；高效液帽：包封率郑州人学硕I：学位论文ABS’I’RAC’I’There8retwopartsinthispaper．Thepartone，untreatedeggphospholipidsasstartingmaterialWasseparatedtogainE80andthedeepproductE98，andthequalitiesoftwoproductswcreevaluated．ThequalityparametersofE80includeacidvalue,iodinevalue,saponificationvalue,therel

6、atedsubstance,thewatercontent，etc．ExceptfortheoptionsofqualityparametersofE80，the1HNMRand’3HNMRWasusedtodeteminethestructureofPC。High—performanceliquidchromatoguaphic(HPLC)Wasusedtoanalysethevarietiescfphospholipidsandcontentsintwoproducts．Theparttwo，thefitratioofE98andcholesterolWaschoosedtopr

7、epareliposomalusnicacid。Thelipnsomes’qualitiesWff／'eevaluatedsuchasparticlesize,durg-to·lipidratio，durg-carrying,encapsulatedefficiency,etc．Thestabilityoftheliposomeswasalsomeasuredafteronemonth．Themethodofprecipitationwi也organics