东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因血清筛选的研究

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1、新疆农业大学硕士学位论文东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因（血清筛选）的研究姓名：宋震宇申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：刘金明;岳城20090601东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因(血清筛选)的研究摘要血吸虫病是世界性分布的、危害最为严重的人畜共患寄生虫病之一。东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。探索东方田鼠抗日本血吸虫机理，筛选东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关靶基因，对研制抗日本血吸虫疫苗和治疗药物具有重要借鉴意义。刘金明组课题组在前期研究中利用东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示eDNA文库，获得10个阳性克隆，为

2、寻找其中具有开发成疫苗潜力的抗原编码基因，为研制疫苗创造条件。本文对其中的8个噬菌体克隆的免疫预防效果进行观察，并对具有较高保护效果的锌指蛋白编码基因进行克隆、表达和重组蛋白免疫预防效果的研究。以8个噬菌体克隆单独或联合免疫BALB／e小鼠，和空白对照组相比，展示日本血吸虫锌指蛋白的1号噬菌体克隆免疫组在两次实验中分别获得了32．10％和31．25％的减虫率、61．14％和47．31％的肝脏减卵率，虫体合抱率分别由92．59％、57．390／,下降到69．09％、41．03％：其它噬菌体克隆单独免疫组或联合免疫组在第一

3、次实验中获得了8．02％一32．72％的减虫率和40．19％．69．53％的减卵率，但在第二次实验中未能得到验证。以RT-PCR技术从血吸虫成虫mRNA中成功克隆日本血吸虫锌指蛋白编码基因(我们将其命名为Sjznfl)的全长ORF序列，其ORF全长1014bp，编码337个氨基酸，与GenBank登陆号为AY222909和EZ000159的日本血吸虫锌指蛋白基因序列比对，核苷酸同源性分别为99．7％和99．4％；氨基酸序列同源性分别为99．4％和98．5％。其中含有一个锌指蛋白结构域。将该全长序列连接到pGEX-4T-

4、2表达载体上，构建重组表达质粒并用大肠杆菌BL21表达，经IPTG诱导，获得表达产物为63KDa的融合蛋白。应用重组蛋白免疫BALB／e小鼠，获得了54．62％的减虫率和75．39％的肝脏减卵率。本研究首次通过实验验证日本血吸虫环型锌指蛋白编码基因的表达产物具有良好的免疫预防效果。研究结果提示日本血吸虫环型锌指蛋白编码基因在疫苗方面具有重要研究价值。关键词；日本血吸虫：噬菌体展示抗原：免疫：锌指蛋白基因；表达StudiesonthetargetSchBtosomajaponicumgenes(screenedwiths

5、eara)relatedtotheresistanceofMicrotusfortisAbstractSchistosomasisisoneoftheword-widespreadparasiticzoonosisthatcausesserioushealthyproblemtobothhumanandanimals．Itwasreportedthatthere锄屯40speciesofmamalsintheendemicareacouldbenaturallyinfectedwithSchistosomajaponi

6、eum(S．japonicum)，andMicrotusfortis(M．fortis)istheonlymamaliananimalswithnativeresistancetoS．iaponicum．Exploringtheanti-schistosomamechanismofM．fortis，screeningthegenesofM．fortisortargetgenesofS．japonicumthatrelatedtotheresistancecouldprovidesomeusefulinformation

7、forthedevelopmentofanti—schistosomulavaccinesanddrugs．Tenpositivecloneswereobtainedinpreciousworkoftheliujinming、sgroup，byscreeningaadultWOHnphagedisplaycDNAlibraryfromwormsofS．japonicumwith毹shsemofMicrotusfortis．Inordertofindthecandidatevaccineantigenencodingge

8、nes，weused8ofp6sitiveclonesalone01"ascocktailvaecines。tovaccinateBALB／cmiceandobservethepreventiveeffectstosenstosomiasisjapanica。Compared、Ⅳiththeblankcontrolgroup，va