生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定2

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1、生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定【实验指导】一、实验原理某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖）与斐林试剂发生作用，可以生成砖红色沉淀。斐林试剂实际是Cu2+的碱性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，Cu2+则被还原成砖红色的Cu2O沉淀。反应式为：CH2OH—（CHOH）4—CHO+2Cu(OH)2→CH2—OH—（CHOH）4—COOH+Cu2O↓+2H2O脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色。苏丹Ⅲ在脂肪中的溶解度比在酒精中的溶解度大，当用苏丹Ⅲ的酒精溶液处理含

2、有脂肪的生物组织时，酒精中的苏丹Ⅲ进入脂肪中，将脂肪染成橘黄色。蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可以产生紫色反应。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。二、目的要求初步学会鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。三、材料用具1．实验材料（1）做可溶性还原糖的鉴定实验，应该选择含糖量较高、颜色为白色或近于白色的植物组织，以苹果、梨为最好。（2）做脂肪的鉴定实验，应该选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前需浸泡3

3、～4h。（3）做蛋白质的鉴定实验，可用浸泡1～2d的黄豆种子（或用豆浆），或用鸡蛋蛋白。2．仪器和试剂（1）仪器：剪刀，解剖刀，双面刀片，试管，试管架，试管夹，大小烧杯，小量筒，滴管，玻璃漏斗，酒精灯，三脚架，石棉网，火柴，研钵，石英砂，纱布，载玻片，盖玻片，毛笔吸水纸，显微镜。（2）试剂：斐林试剂（主要由质量浓度为0．1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0．05g/mL的CuSO4溶液配制而成），苏丹Ⅲ或苏丹IV染液，双缩脲试剂，体积分数为50%的酒精溶液，蒸馏水。 四、实验的方法、步骤1．可溶性还原糖的鉴定制备生物组织样液取

4、样注入试剂加热和观察2．脂肪的鉴定制备生物组织实验材料染色去浮色制作临时装片→放在显微镜下观察（先低倍镜后高倍镜）3．蛋白质的鉴定制备生物组织样液注入组织样液注入试剂A注入试剂B观察颜色变化 五、实验成功的关键及注意事项1．实验成功的关键在于实验材料的选择（1）可溶性还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官)，而且组织的颜色较浅，或近于白色的。经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。5（2）脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功。（3）蛋白质的鉴定实

5、验，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋。2．注意事项（1）斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1g/mL的NaOH溶液)和乙液(0．05g/mL的CuSO４溶液)分别配制、储存，使用时再临时配制，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。（2）双缩脲试剂的使用，应先加试剂A(0.1g/mL的NaOH溶液)，造成碱性的反应环境，再加试剂B(0.01g/mL的CuSO４溶液)。（3）在鉴定可溶性糖的实验中，对试管中的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向

6、实验者，以免沸腾的溶液冲出试管，造成烫伤。（4）在蛋白质的鉴定实验中，若用鸡蛋清作实验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易洗刷。（5）在鉴定脂肪的实验中，若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡3～4小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，染色时间不宜过长。 【基础训练】一、选择题1．可用于鉴定生物组织中可溶性还原糖的试剂是A．斐林试剂B．双缩脲试剂C．苏丹Ⅲ染液D．苏丹Ⅳ染液解析：斐林试剂能与还原性糖发生颜色反应，出现砖红色沉淀，双缩脲试剂鉴定蛋白质，苏丹Ⅲ、苏丹IV鉴定脂肪。答案：A2．

7、对斐林试剂和双缩脲试剂的配方，叙述不正确的是A．都含有NaOH溶液和CuSO４溶液B．斐林试剂的配制是将4～5滴0.05g/mL的CuSO４溶液滴入2mL0.1g/mL的NaOH溶液中即成C．双缩脲试剂是将3～4滴0.01g/mL的CuSO４溶液滴入2mL0.1g/mL的NaOH溶液中混合而成的D．双缩脲试剂含有两种试剂：质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.01g/mL的CuSO４溶液解析：斐林试剂和双缩脲试剂的化学成分相同，但配制时使用的剂量和浓度及加入试剂的顺序不同。斐林试剂的配制是将4～5滴0.05g/m

8、L的CuSO4溶液滴入2mL0.1g/mL的NaOH溶液中即成，必须现用现配。双缩脲试剂是用质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.01g/mL的CuSO4溶液配制而成的，使用时先向待检样品中加入2mL0.1g/mL的NaOH溶液，振荡摇匀，再向试