高效液相色谱-化学发光法测定人血清及动物组织中的己烯雌酚

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1、第31卷第8期分析试验室Vol.31．No．82012年8月ChineseJournalofAnalysisLaboratory2012－8高效液相色谱-化学发光法测定人血清及动物组织中的己烯雌酚!李冉，章竹君，付爱华，李云云，张建锋(陕西师范大学，陕西省生命分析化学重点实验室，西安710062)摘要:基于己烯雌酚在酸性介质中对Ce(Ⅳ)和Rh6G的化学发光体系的增敏作用，建立了人血清及动物组织中己烯雌酚的高效液相色谱/化学发光检测方法。色谱柱为Welchrom-C18

2、柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇-水－8－6(75:25，V/V，pH6.0)。己烯雌酚在1.0×10～2.5×10g/mL范围内呈良好－9－7线性，在优化的实验条件下最低检出限为3.0×10g/mL。对5.0×10g/mL的己烯雌酚进行11次平行测定，其相对标准偏差为2.1%。关键词:高效液相色谱;化学发光;己烯雌酚中图分类号:O657.7文献标识码:A文章编号:1000-0720(2012)08-023-04己烯雌酚(Diethylstilbestrol，DES)是一种人工接用于复杂生物样品中DES的检测。本文建立的己合成的雌激素类物质，

3、具有酚羟基结构，属于二苯乙烯雌酚高效液相色谱-化学发光检测法，将人血清及烯类。其药理和治疗作用与天然雌二醇相同，主要动物组织样品经简单处理后用高效液相色谱进行分用来治疗雌激素不足和体内激素失调引起的功能性离，化学发光法柱后检测，解决了化学发光选择性差出血、闭经等疾病。同时DES也是一种有效的促蛋的问题。此法较国标法的灵敏度高40倍。白合成类固醇，可以促进动物增重，增加蛋白质沉积1实验部分和减少脂肪沉积。因此在许多国家，被用作生长素1.1仪器和试剂添加于可食用动物的饲料中，以促进动物生长，提LC-6A高效液相色谱仪(Shimadzu，日本);7125高瘦肉率。然

4、而早在二十世纪七十年代，就有研究型手动进样阀(20μL-loopContati，CA，美国);IFFM-者发现DES的使用可诱发阴道癌，并与月经失调、D型流动注射化学发光分析仪(西安瑞迈)。宫外孕、早产及不育症的发生有关，而长期食用含硫酸铈储备液(上海国药集团化学试剂公DES残留的动物肉食品，会对食用者的生理带来不司):用3mol/L的H2SO4配制成0.1mol/L的硫良影响，如致癌，对肝肾的损害，导致儿童发育异常酸铈储备液;罗丹明6G储备液(上海国药集团化－3和体内激素的失调等。我国严格控制DES的使用，学试剂公司):用二次水配制成5.0×10mol/L的

5、国家标准(GB/T5009.108－2003)中禽畜组织己烯储备液;己烯雌酚(中国药品生物制品检定所，含［1］雌酚残留量的测定方法为高效液相色谱法，其检量99.9%):用甲醇:水(75:25，V/V，pH6.0)溶液出限为0.25mg/kg。配制成储备液。试剂均为分析纯，水为二次水，甲对DES残留的检测方法有酶联免疫测定法醇为色谱纯。［2］(ELISA)，高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-1.2色谱条件［3］［4］MS)，气相色谱法(GC)等。测定己烯雌酚的化色谱柱:Welchrom-C18柱(4.6mm×250mm，［5～7］学发光法有较高的灵敏度，但选择

6、性差，不能直5μm);流动相:甲醇－水(75:25，V/V，pH6.0);流收稿日期:2011-01-07;修订日期:2011-02-25基金项目:中央高校基础研究基金项目(GK20091004)资助作者简介:李冉(1986－)，女，硕士研究生;E-mail:liran．huajiao@163．com—23—第31卷第8期分析试验室Vol.31．No．82012年8月ChineseJournalofAnalysisLaboratory2012－8速:1.0mL/min;

7、柱温:室温;进样量:20μL。2.2化学发光反应条件的选择－51.3生物样品处理2.2.1罗丹明6G的浓度在1.0×10～1.0×－3血清的处理:取血清0.5mL，加入0.5mL的10mol/L的浓度范围考察了罗丹明6G对化学发甲醇，用涡漩振荡器振荡1min，在超速离心机中离光信号的影响。结果表明，罗丹明的浓度为1.2×－4心10min，取上清液进样。动物组织的处理:将样10mol/L时，化学发光信号最强。品捣碎，准确称取5g浸泡于10mL的甲醇溶液2.2.2H2SO4的浓度对浓度在0.5～4.0mol/L中，超声半小时后，用匀浆管匀浆半小时，在超速离的范围内

8、的H2SO4进行了实验，发现在浓度为3