两种锦鸡儿种子人工老化中生理生化变化及基因组dna损伤的issr研究

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1、那潼两种锦鸡儿种子人[老化中生理生化变化和基因组DNA的lSSR研究!两种锦鸡儿种子人工老化中生理生化变化及基因组DNA损伤的ISSR研究研究生：那潼导师：高洪文研究员刘大林副教授(扬州大学动物科学与技术学院)摘要本文以柠条锦鸡儿和小叶锦鸡儿种子为研究对象，对经过高温高湿(40。C，RMl00％)和甲醇(50％)老化处理后的种子生理生化变化和基因组DNA损伤的ISSR指纹图谱的建立两方面进行了研究。通过上述研究，探讨了种子劣变的主要原因，探索了适宜柠条锦鸡JL弄ll小叶锦鸡JLlcb子活力测定方法，深入地了解锦鸡儿属植物种子质量的分子基础，更

2、好的认识锦鸡儿属植物种子质量的本质，同时也为种质资源的保存和生产用种的贮减提供理论指导。结果表明：供试种子在老化过程中，发芽率和发芽指数显著降低，在同等条件下与老化的短命牧草种子的发芽率比较接近，说明柠条锦鸡儿和小叶锦鸡儿种子活力的下降较为迅速。在同一发芽率水平，高温高湿老化处理后的种子浸出液电导率的增幅明显高于甲醇处理后的种子，原因可能是高温高湿老化对种子膜结构的破坏更为严重。随着供试种子的老化，种子中可溶性蛋白质和酸性磷酸酯酶活性的显著变化，以及可溶性糖的大幅升高，表明种子老化使种子内部的代谢系统受到破坏。这可能是柠条锦鸡儿和小叶锦鸡儿种

3、子活力衰退的一个原因。小叶锦鸡儿种子在发芽率、可溶性蛋白含量、酸性磷酸酯酶(ACP)和过氧化物酶(POD)活性等方面表现出活力高于柠条锦鸡儿种子。主成分分析结果表明，第一主成分对SOD和ACP活性有较大的负荷系数，说明包括相对电导率在内的七个指标中，SOD活性和ACP活性是衡量柠条锦鸡儿扬州大学硕士学位论文和小叶锦鸡儿种子活力的可靠指标。筛选出应用于柠条锦鸡儿和小叶锦鸡儿老化种子基因组DNA的损伤的引物，并建立了老化处理后两种锦鸡儿种子的ISSR指纹图谱。在100条引物中有24务可应用于老化种子的研究，并从中找出了6条引物U835，U857，

4、U808，U81l，U834及U868用来分析老化种子的ISSR扩增带型的变化。结果发现：柠条锦鸡Jl和小叶锦鸡儿种子在人工老化过程中其基因组DNA的损伤是随机发生的。随着；，化程度的加重，随机引物在基因组DNA上的特定结合位点被破坏，表现为ISSR扩增的DNA带的减少甚至消失。研究结果表明，老化种子DNA的质量对于ISSR研究具有重要意义。建议在进行老化种子DNA提取时采用简易的SDS法，这种方法简便快速、经济节约，对DNA的机械损伤不大，适用于老化种子DNA的研究。关键词：柠条锦鸡儿小叶锦鸡儿人工老化生理生化ISSR那潼两种锦鸡儿种子人【

5、老化中生理生化变化列基因组DNA的iSSR研究坐StudyonPhysiologicalandBiochemicalChangesandGenomieDNADamagesbyISSRofTwoCaraganaSpecicesSeedsDuringArtificialAgingM．S．Candidate：NaTongAdvisor：Prof．GaoHong·wenProf．LiuDa．1in(CollegeofAnimalScienceandTechnology,Yangz}louUniversity)AbstractAstudyondeter

6、iorationofseedsofCaraganakorshinskii，KomandCaragana．Micro-phlla．Lamwasconductedtoanalyzethephysiologicalandbiochemicalchanges，madtheISSRfingerprintsofgenomicDNAdamagesofseedswereestablishedduringartificialagingunder50％methanolsolutionand40。C，100％RHtreatment．Understan—dingth

7、echangesinvolvedinthisprocesswouldenabletoselectionofbettervigortestfortheevaluationseedqualityofC．korshinskii，KomandC．microphlla．Lam，Theresearchonthemechanismofseeddeteriorationwillhelptoprovideinstructionforthepreservationandstoragegermplasmofseeds．Theresultsshowed：Thesee

8、dgerminationpercentageandgerminationindexoftwoCaraganaspeciesdecreasedsignificantl