猪伪狂犬病病毒单抗双夹心elisa的构建

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1、http://www.paper.edu.cn第38卷第4期河南农业大学学报Vo1．38No．42004年l2月JournalofHenanAgriculturalUniversityDec．2oo4文章编号：1000—2340(2OO4)O4—0387—07猪伪狂犬病病毒单抗双夹心ELISA的构建祁小乐，崔保安，牛春玲，王莉娟，刘占通(河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002)摘要：建立了检测猪伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvlms，PRV)的单克隆抗体双夹心酶联免疫吸附试验(Enzyme-llnkedimmunosor-bentass

2、ay，EL1SA)方法，为该痛的快速诊断奠定了基础．作者对其组装条件进行了筛选，认为兔抗PRVI最佳包被质量浓度为4．59mg·L～；抗PRV的单克隆抗体(Monoclonalantibodies，McAb)的最佳质量浓度为6．45mg·L；最佳对闭剂为l0g·LBSA(牛血清白蛋白)，封闭时间为60rain，制定了科学的结果判定标准，最低病毒检出量为200／tg·L～，与病毒分离、动物试验和中和试验相比较，该方法特异、灵敏、可靠、方便．关键词：猪伪狂犬病病毒；单克隆抗体；双夹心EL1SA中图分类号：TS852．659．1文献标识码：AEstabili

3、shmentofmonoclonalantibodiesdoublesandwichELISAdetectingporcinepseudorabiesvirusQIXiao-le，CUIBao-an，NIUChun-ling，WANGLi-juan，LIUZhan-tong(CollegeofAnimalHusbandryandVeterinaryScience，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China)Abstract：Thedoublesandwichenzyme．1inkedimmunos

4、orbentassay(ELISA)fordetectionofporcinePseudorabiesvirus(PRV)wasdeveloped，whichlaidthebasisofthediagnosisofthedisease．Thebestcoatingingqualityconcentra-tionoftherabbit-anti-PRVIsGWas4．59mgL。．ThebestqualityconcentrationofMcAbWas6．45mgL一．10gL一BSA-PBSTWasselectedastheoptimalblockin

5、greagent．andtheoptimalblockingtimeis60min．Thescien-tificcriterionofdeterminationWasmade．ThesensitivityofthedoublesandwichELISAWas200ggL～．TheassayWasspecific，sensitive，reliable，andconvenient．Keywords：porcinePRV；McAb；DoubleSandwichELISA猪伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由伪狂犬病病毒引起的多种家畜和野生动物以发热

6、、奇痒(猪除外)、繁殖障碍、脑脊髓炎为主要症状的一种高度接触性传染病⋯．近年来，该病不断传播蔓延，分布广泛，危害严重，给动物健康尤其是养猪业造成了巨大损失，因此开发特异性强、敏感性高、简便、快速的诊断方法是防制该病的关键之一．由于PRV疫苗的广泛应用，抗体阳性并不能断定PRV感染，最终确诊仍依赖于病毒检测_2J．病毒分离、中和试验、电镜技术等传统检测病毒的方法费时费力；聚合酶链式反应(Polymerasechainreaction，PCR)、核酸探针等新型技术虽然特异性好、灵敏度高，但需要特殊设备和专业技术，也难以推广_3]．酶联免疫吸附试验(ELIS

7、A)特异、灵敏、快速、简便，可迅速地检测大量样品，在PR诊断中日益受到人们的重视_4]．国外早已将ELISA技术运用于PR的诊断研究中j，我国科研工作者也正在积极研发该技术，并已经取得了一定的成绩_8]．娄高明_9进行了双抗体夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究，苗得园_l们将单抗的特异性和生物素．亲和素(LAB)系统的灵敏性结合起来，建立了检测伪狂犬病毒的单抗夹心收稿日期：2004—09—12基金项目：国家“十五”重大攻关项目(2001BA804A30—11)作者简介：祁小乐，河南农业大学硕士研究生．通讯作者：崔保安(1948一)，男，河南郑州人，河

8、南农业大学教授，主要从事动物微生物与免疫学研究．转载中国科技论文在线http://www.pa