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1、HPLC法测定婴幼儿配方奶粉中香兰素史海良，王浩*（国家食品质量安全监督检验中心，北京100094）摘要建立了婴幼儿配方奶粉中香兰素的高效液相色谱测定法。方法采用C18（5um，4.6mm×250mmi.d）反相色谱柱，流动相为乙腈和0.02moL/L磷酸二氢钠溶液(调pH4.0），流速1.0mL/min，检测波长276nm，柱温30℃，进样量20uL。方法定量限10mg/kg，加标回收率96.9-102.8%，线性范围1.00-50.00µg/mL，相对标准偏差为2.15%。该法具有样品预处理简单,灵敏度高,分析时间短等优点,
2、适用于婴幼儿配方奶粉中香兰素的快速测定。关键词高效液相色谱仪，婴幼儿配方奶粉，香兰素0前言香兰素（4-羟基-3-甲氧基苯甲醛)是重要的食品添加剂,其被广泛用作糖果、饼干、糕点、饮料等食品的增香剂。日前，卫生部公布《食品用香料、香精使用原则（征求意见稿）》，明确把纯乳等20种食品列为禁加食用香料香精范围，其中婴儿配方食品、较大婴儿和幼儿配方食品也拟被“禁香”更是引发业内广泛关注。目前,国内外测定香兰素的方法主要有光度法、高效液相色谱法、电化学法等[1][2]，而且还没有国标方法。因此，对婴儿配方奶粉中的香兰素进行定量分析具有一定现
3、实意义。本文将样品经酸沉蛋白后经HPLC法进行直接测定,获得较满意的结果。1材料与方法1.1实验仪器，试剂，样品1.1.1仪器Agilent1100型高效液相色谱仪，配置自动进样器，AgilentG1315B二极管阵列检测器。1.1.2试剂乙腈、冰醋酸、盐酸、氢氧化钠、磷酸二氢钠：北京化工厂。以上均为分析纯。香兰素：北京化学试剂公司。1.1.3样品婴幼儿配方奶粉购自本地超市。1.2色谱条件色谱柱：金欧亚ODS柱：5um，4.6mm×250mm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：20uL；检测波长：276nm；流动相
4、：乙腈+0.02moL/L磷酸二氢钠溶液（30：70，V/V，冰醋酸调pH4.0）。1.3样品处理准确称取5g样品，用25.0mL50℃热水溶解，超声10min，用5mol/L盐酸溶液调节pH值至1.7，放置2min后，再用2.5mol/L氢氧化钠溶液调节其pH值至4.5。将样品溶液移至50mL容量瓶中，用水定容至刻度后，倒入漏斗用快速定性滤纸自然过滤，弃去最初滤液，在50mL锥形瓶中收集滤液，并充分混匀后用0.45µm滤膜将样液过滤，进样20μL进行色谱分析。1.4定性定量方法采用标准物质的保留时间对样品峰进行准确定性，采用外
5、标法以峰面积计算定量，依次配制不同浓度的标准溶液进样分析,以质量浓度(μg/ml)为横坐标,以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。2结果与讨论2.1前处理方法的优化婴儿配方奶粉中蛋白质含量较高，因此，本方法先用50℃热水超声提取，再经酸沉蛋白后直接用测定。实验证明，该法操作简单，易于推广，加标回收率大于96.0%，可以满足婴儿配方奶粉中的香兰素日常检测要求。2.1色谱条件的优化据文献报道，可用于分离香兰素的色谱柱主要包括C18和C8柱。本文分别采用上述两种色谱柱进行分离试验，发现金欧亚ODS色谱柱对香兰素具有较好的分离效果；香兰素属于中
6、等极性化合物，为了有利于色谱峰的分离及峰形的改善，选用乙腈+0.02moL/L磷酸二氢钠溶液（30：70，V/V，冰醋酸调pH4.0）为流动相进行洗脱；对香兰素标准溶液用紫外光谱仪进行扫描,发现其在276nm处有共同较大吸收峰；进样量大可提高测定的灵敏度,实验中发现,当进样量达到20uL时,峰形较好。综合以上色谱条件的测定结果令人满意(如图1所示)。图1加标样品（加标100mg/kg）的色谱图2.2标准曲线线性范围和方法检测限将逐级稀释的标准工作液分别进样20μL，测定结果经线性回归，线性范围：线性范围：1.0-50.0µg/m
7、L；回归方程（y为峰面积，x为浓度，µg/ml）：y=37.799x-24.391，线性相关系数：0.9999。进空白样,以基线3倍噪声值在标准曲线查得结果计算,按测定方法计算,本方法最低检出量为10mg/kg。2.3方法的回收率和精密度称取空白样品6份,每份5.00g,分别添加香兰素标准品0.05mg和0.5mg,按供试品制备方法处理后,进行测定,结果见表1。从表中可看出,样品加标回收率96.9%-102.8%,平均相对标准偏差为2.15%（n=6）。表1加标样品回收率（%）与相对标准偏差（%）样品编号添加浓度(mg/kg)检
8、测浓度(mg/kg)加标回收率（%）110.09.9299.2210.09.6996.9310.010.28102.84100.0101.60101.65100.0101.50101.56100.099.4099.43结论建立了婴幼儿配方奶粉中香兰素的高效液相色
