柱式腐殖酸清除剂

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1、CAT#:60801-30天CAT#:60801-100净常温运输及保存沙系列柱式腐殖酸清除剂ColumnHumicAcidErasol使用手册V1.2北京天恩泽基因科技有限公司北京市海淀区上地信息路26号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506网址：www.tiandz.com；电话：400-6765278；电邮：order@tiandz.com产品及特点用绝大多数文献报道的方法从土壤或湖海沉积物中提取的DNA都含有棕黑色或黑色的腐殖酸的污染，用天泽基因的土壤DNAOUT从泥碳（腐殖酸含量超过50%）等腐殖酸丰富的土壤样品中提取的DNA也有腐殖酸污染，它们往往

2、对PCR等后续反应有极大的抑制作用。本产品从天泽基因柱式DNABACK改进而得，专门用于从土壤DNA样品中清除腐殖酸污染。1.去污染效果好，能使腐殖酸的浓度降低10倍以上。2.DNA回收率高，一般都在80%以上。3.操作过程简单快速，只需要10分钟。4.扩容性好，可小规模操作，也可以大规模操作。5.处理后的样品原液或稍微稀释后即可用于PCR。规格及成分成份编号30次包装100次包装专用上柱液9mL30mL离心吸附柱6091130套100套通用洗柱液6040830mL100mLDNA洗脱液7070510mL5mL使用手册60801sc1份1份运输及保存常温运输及保存，

3、有效期一年。自备试剂无使用方法1.将0.3mL专用上柱液与50uL或50uL以下的含腐殖酸的DNA溶液轻柔混匀。如果DNA溶液体积超过50uL,专用上柱液的体积需按1:6(DNA溶液:专用上柱液)的比例相应增加。不要剧烈震荡，否则DNA容易断裂。2.将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中，套上收集管，放于离心管架上，静置3-5分钟，12000-15000g离心1分钟并倒掉收集管中的液体。若一次加不完，可分两次加入并离心。3.加入0.5mL通用洗柱液于离心柱中，12000-15000g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。4.重复第3步操作1次。5.12000-15000g离心

4、1分钟以去除离心柱中的残留液体。6.将离心柱置于一新的干净的离心管（自备）中，加入50uL通用洗脱液，静置3-5分钟，12000-15000g离心1分钟。7.离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。使用效果图注：从泥碳(腐殖酸含量大于60%)中提取的DNA用本产品处理前(B)和处理后(A)的颜色对比。处理前OD340为4.0（4为所用分光光度计的上限，实际读数可能远高于4），处理后降低到0.3。处理前的原液、10倍和100倍稀释液均无PCR扩增，而处理后均可以扩增。疑难解答Q:如何判断提取的ＤＮＡ没有腐植酸污染？A：方法一是目测

5、法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测最大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示DNA不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR扩增。Q:腐殖酸的最大吸收波长是多少？A：腐植酸（humicacid）是一大类呈棕黑色或黑色的物质,其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其最大吸收波长也各不相同。有的土壤的腐殖酸的最大吸收波长在260nm（见Appl.Environ.Microbiol.,63：4993,1997），有的则在340nm，所以用特定的波长测定OD值时波长的选定要根据土壤而决定。Sigm

6、a,Fluka等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其最大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。Q:是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响最好通过实验来验证。如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品（已知的不含污染的DNA）能够发生，说明可能有抑制作用。Q：除本方法外，还有什么有效方法去除DNA样品中的腐植酸？A：可以先电泳，然后用超大片段胶回收试剂MagicGelDNABACK（CAT#：60706）纯化DNA，如此得到的DNA原液一般可以直接扩增。

7、Q：本产品与柱式DNABACK有何区别？A：本产品由柱式DNABACK改进而来，主要区别一是使用了不同的上柱液，减少了硅胶膜对DNA的非特异吸附，更适用于微量DNA样品；二是上柱液中含有腐殖酸去除试剂，适合于土壤DNA样品。Q：在用土壤DNA进行细菌专一性PCR时，为何没加DNA模版的阴性对照有扩增产物出现？A：这是由于使用的TaqDNA聚合酶一般从E.coli表达菌株中提取，提取过程中污染了E.coli的基因组DNA，而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA基因组DNA模版，所以会产生扩增。建议使用高质量的TaqDNA聚合酶。技术资料腐殖酸及其特点腐植