小反刍兽疫病毒rt-lamp检测方法的建立

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1、一32一懒嘲中国动物检疫2010年第27卷第4期小反刍兽疫病毒RT-LAMP检测方法的建立李林，吴晓东，包静月，李金明，王君玮，王志亮(中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛266032)摘要：利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT—LAMP)建立了小反刍兽疫病毒快速检测方法，同时评价了该方法的灵敏性和特异性。结果表明，根据小反刍兽疫病毒N基因保守区域设计的LAMP引物能够在63"(2恒温下，1小时内实现目的核酸的大量扩增，由于在检测前加入荧光指示试剂，检测结果可以直接用肉眼判断，避免了由于开盖检验带来的扩增产物污染导致的假阳性。该检测体系具有较高的

2、特异性，只能特异性地检测目的病毒，与其他同属的病毒或类似病毒等无交叉反应；具有较高的检测灵敏度，比普通RT-PCR灵敏性高10倍，与荧光RT—PCR的灵敏度相当。关键词：小反刍兽疫病毒；逆转录环介导等温核酸扩增；检测中图分类号：S852．659．5文献标识码：A文章编号：1005—944X(2010)04—0032—04DevelopmentofaReverseTranscriptionLo叩-MediatedIsothermalAmplificationAssayforRapidDerectionofPestedespetitsRuminants

3、VirusLiLin，WuXiao-dong，BaoJing—yue，LiJin—ming，WangJun-wei，WangZhi-liangationalDiagnosticCenterforExoticAnimalDiseases，ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter，Qingdao266032，China)Abstract：Aone—step，singletube，reverse-transcriptionloop—mediatedisothermalamplification(RT—LAMP)assa

4、ywasdevelopedforthedetectionofPestedespetitsruminantsvirus(PPRV)．AsetofprimersweredesignedbasedontheNgenereferencesequencesofthePPRV．TheassaywasoptimizedtoamplifyPPRVRNAbv-cubationat63℃for60min．Withoutgelelectrophoresis，theLAMPampliconwasvisualizeddirectlyinthereac-tiontubebyt

5、headditionoffluorescentdetectionregentfornaked—eyeinspection．TheassaywasspecificforPPRVtodetectdifferentPPRVisolates．andtherewasnocross．reactionwithotherrelatedvirusesincludingRinderpestvirus，Caninedistempervirus，andeta1．Thedetectionlimitoftheassaywassimilartothatofre—a1．timeR

6、T．PCRand10foldhigherthantheconventionalIT．PCR．ThisRT—LAMPtassayhaspotentialapplica—tionsforclinicaldiagnosisaswellassurveillanceofPPR．Keywords：Pestedespetitsruminantsvirus；Reverse．transcriptionloop—mediatedisothermalamplification；detection小反刍兽疫(pestedespetis现主要流行于非洲西部和中部，阿拉传统的

7、检测方法有琼脂糖凝胶ruminants，PPR)是由小反刍兽疫病伯半岛、中东和南亚次大陆]。其病原免疫扩散、间接荧光抗体检测、病毒毒(pestedespetisruminants小反刍兽疫病毒属于副粘病毒科麻中和试验等，这些方法操作较复杂virus,PPRV)引起的一种山羊、绵羊疹病毒属(morbil1ivirus)，基因组费时较长，而且灵敏度或特异性不等小反刍兽类的急性接触传染性疾由单股负链无节段RNA组成，RNA链高，不适合大规模检测与监测，目前病，其发病率和死亡率均较高。本病从3’至5’依次分布着N—P-M—F—H-L该病的检测方法主要有以检

8、测血清1942年首先在非洲的科特迪瓦发现，6个基因，分别编码6种结构蛋白和中病毒抗体的竞争ELISA、间接基金项目：农业部