子mcp1生成的影响

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1、第38卷第4期南京医科大学学报（自然科学版）2018年4月ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING（NaturalScience）·423·沉默大鼠KAT7基因对亚溶解型C5b⁃9刺激GMC诱导趋化因子MCP⁃1生成的影响*宫雅娟，张婧，刘玉，赵聃，邱文，夏露，王迎伟南京医科大学免疫学系，江苏南京211166［摘要］目的：研究沉默大鼠赖氨酸乙酰基转移酶7（lysineacetyltransferase7，KAT7）基因对亚溶解型（sublytic）C5b⁃9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞（glomerularmessangialcell，GMC）诱导单核趋化蛋白⁃

2、1（monocytechemotacticprotein⁃l，MCP⁃1）生成的影响。方法：针对KAT7基因不同位点，用DNA重组技术设计4个小发夹RNA（shorthairpinRNA，shRNA），分别克隆到真核表达载体pGCsi⁃U6/Neo/GFP/shRNA中。之后，用NeonTM电转仪将上述质粒转染至体外培养的GMC中，再给予sublyticC5b⁃9刺激。行Westernblot实验检查筛选出针对KAT7基因且有最佳沉默效率的shRNA。此外，用real⁃timePCR和ELISA法分别检测GMC行不同分组处理后MCP⁃1的mRNA和蛋白水平。结果：核酸测序表明，重组的shKA

3、T7质粒构建成功。Westernblot显示，shKAT7⁃2是具备最佳沉默效率的shRNA。用shKAT7转染GMC后，由sublyticC5b⁃9刺激GMC诱导的MCP⁃1基因表达水平显著下降。结论：成功构建了大鼠KAT7shRNA真核表达质粒，并初步证实KAT7基因的表达能够促进sublyticC5b⁃9刺激大鼠GMC诱导趋化因子MCP⁃1的合成与分泌。［关键词］KAT7；sublyticC5b⁃9；肾小球系膜细胞（GMC）；MCP⁃1；shRNA［中图分类号］R692.3［文献标志码］A［文章编号］1007⁃4368（2018）04⁃423⁃06doi：10.7655/NYDXBNS

4、20180401EffectofsilencingKAT7geneontheproductionofMCP⁃1inratglomerularmessangialcellsinducedbysublyticC5b⁃9stimulation*GongYajuan，ZhangJing，LiuYu，ZhaoDan，QiuWen，XiaLu，WangYinweiDepartmentofImmunology，NMU，Nanjing211166，China［Abstract］Objective：Toexploretheeffectofsilencingrat（lysineacetyltransferase

5、7）KAT7geneontheproductionofmonocytechemotacticprotein⁃1（MCP⁃1）inratglomerularmessangialcells（GMC）bysublyticC5b⁃9stimulation.Methods：FourkindsofshorthairpinRNA（shRNA）stargetingKAT7geneweresynthesizedandclonedintoeukaryoticexpressionvectorpGCsi⁃U6/Neo/GFP/shRNA.Therecombinantplasmidsweretransfectedin

6、toculturedratGMCbyNeonTMtransfectionsystem，andKAT7proteininthetransfectedcellswasdetectedbyWesternblottofindouttheoptimalshRNAagainstKAT7gene.Moreover，theexpressionofMCP⁃1bothinGMCandinthesupernatantwasmeasuredbyreal⁃timePCRandELISAassays.Results：NucleotidesequencingdemonstratedthattheconstructedKA

7、T7shRNAswerecorrect.WesternblotexperimentshowedthattheshKAT7⁃2couldeffectivelysilencethetargetgene.Meanwhile，aftertheknockdownofKAT7byshRNAintheGMC，theproductionofMCP⁃1wassignificantlydecreaseduponsublyticC