大鼠骨髓间充质干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的标志基因表达受组蛋白乙酰化调控

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1、第３５卷第２１期第三军医大学学报Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．２１２０１３年１１月１５日ＪＴｈｉｒｄＭｉｌＭｅｄＵｎｉｖＮｏｖ．１５２０１３２２９５文章编号：１０００５４０４（２０１３）２１２２９５０６论著大鼠骨髓间充质干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的标志基因表达受组蛋白乙酰化调控徐梦遥，王延洲，徐惠成（４０００３８重庆，第三军医大学西南医院妇产科）［摘要］目的通过骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）与膀胱平滑肌细胞（ｂｌａｄｄｅｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ，ＢＳＭＣｓ）接触共培养探讨组蛋

2、白乙酰化对ＢＭＳＣｓ分化能力的影响。方法分别采用密度梯度离心法和胶原酶消化法培养大鼠ＢＭＳＣｓ及ＢＳＭＣｓ至第３代，并对ＢＭＳＣｓ进行了鉴定；以单独培养的ＢＭＳＣｓ作为对照组，接触共培养的ＢＭＳＣｓ为实验组；运用免疫荧光化学染色法分别对２组ＢＭＳＣｓ中的平滑肌标志性蛋白平滑肌α肌动蛋白（αｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ，αＳＭＡ）、平滑肌肌球蛋白重链（ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｍｙｏｓｉｎｈｅａｖｙｃｈａｉｎ，ＳＭＭＨＣ）、Ｃａｌｐｏｎｉｎ进行检测，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测αＳＭＡ蛋白、Ｃａｌｐｏｎｉｎ蛋白在ＢＭＳＣｓ中的表达，并

3、用微球菌核酸酶（ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｌｎｕｃｌｅａｓｅ，ＭＮａｓｅ）对平滑肌３个标志性基因的启动子区进行了染色质开放性的检测，同时运用了ＣｈＩＰ技术分析了αＳＭＡ、ＳＭＭＨＣ启动子区组蛋白乙酰化水平对ＢＭＳＣｓ向平滑肌分化的影响。结果大鼠原代ＢＭＳＣｓ流式检测显示ＣＤ２９表达阳性，阳性率为９９．８％，ＣＤ３１、ＣＤ４５表达阴性，阳性率为６．３０％、１．０４％；免疫荧光显示平滑肌３种标志性蛋白的表达均随时间的延长而增加；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示随着共培养天数的增加αＳＭＡ蛋白、Ｃａｌｐｏｎｉｎ蛋白在实验组中的表达相比对照组有明显的增加

4、；ＭＮａｓｅ显示实验组的ＢＭＳＣｓ启动子区染色质对核酸酶的敏感性明显高于对照组，ＣｈＩＰ显示实验组中ＢＭＳＣｓ平滑肌标志性基因αＳＭＡ、ＳＭＭＨＣ、Ｃａｌｐｏｎｉｎ启动子区Ｈ４乙酰化水平较未分化前明显增加（Ｐ＜０．０５）。结论组蛋白乙酰化程度的增加促进了ＢＭＳＣｓ向ＢＳＭＣｓ分化。［关键词］骨髓间充质干细胞；膀胱平滑肌细胞；组蛋白乙酰化；启动子［中图法分类号］Ｒ３２２．６２；Ｒ３２９．２；Ｒ３９４．２［文献标志码］ＡＨｉｓｔｏｎｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍａｒｋｅｒｇｅｎｅｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ

5、ｔｉｏｎｏｆｒａｔＢＭＳＣｓｔｏＢＳＭＣｓＸｕＭｅｎｇｙａｏ，ＷａｎｇＹａｎｚｈｏｕ，ＸｕＨｕｉｃｈｅｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｙｎｅｃｏｌｏｇｙａｎｄＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓ，ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００３８，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｈｉｓｔｏｎｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｏｆｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓ

6、ｔｅｍｃｅｌｌｓ（ＢＭＳＣｓ）ｄｉｒｅｃｔｌｙｃｏｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈｂｌａｄｄｅｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ（ＢＳＭＣｓ）．ＭｅｔｈｏｄｓＤｅｎｓｉｔｙｇｒａｄｉｅｎｔｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎａｎｄｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｔｒａｉｎｔｈｅｒａｔＢＭＳＣｓａｎｄＢＳＭＣｓｔｏｔｈｅ３ｒｄｐａｓｓａｇｅ．Ａｆｔｅｒｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ，ＢＭＳＣｓｃｏｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈＢＳＭＣｓｗｅｒｅｒｅｇａｒｄｅｄａｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｅｌｌｓ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｃｅ

7、ｌｌｓｃｕｌｔｕｒｅｄａｌｏｎｅａｓｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｃｅｌｌｓ．ＩｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓｌａｎｄｍａｒｋｐｒｏｔｅｉｎｓ，αｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ（αＳＭＡ），ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｍｙｏｓｉｎｈｅａｖｙｃｈａｉｎ（ＳＭＭＨＣ），ａｎｄｃａｌｐｏｎｉｎｉｎｔｈｅ２ｋｉｎｄｓｏｆＢＭＳＣｓ．ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｗａｓａｄｏｐｔｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｓｏｆαＳＭＡａｎｄｃａｌｐｏｎｉｎ．Ｍｉｃｒ

8、ｏｃｏｃｃａｌｎｕｃｌｅａｓｅ（ＭＮａｓｅ）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎｓｏｆｔｈｅ３ｍａｒｋｅｒｇｅｎｅｓｆｏ